عزل خلايا IPE و RPE: تقنية للحصول على الخلايا الظهارية المصطبغة من عين الخنازير المعزولة

تحتوي عين الخنازير على مجموعة من الخلايا الظهارية المستطيلة التي تحتوي على العديد من الميلانوسومات - العضيات التي تساعد في امتصاص الضوء - مما يؤدي إلى الظهور المصطبغ لهذه الخلايا. اعتمادا على موقع هذه الخلايا ، تسمى الخلايا الظهارية الموجودة أسفل شبكية العين بالخلايا الظهارية الصبغية الشبكية ، أو خلايا RPE ، وتعرف الخلايا المبطنة للقزحية باسم الخلايا الظهارية الصبغية للقزحية ، أو خلايا IPE.

لعزل خلايا RPE و IPE ، ابدأ بأخذ عين الخنازير. اغمر العين في محلول مطهر مناسب لإزالة أي ميكروبات عالقة على سطح العين.

قم بإزالة العين من محلول المطهر واستخدم إبرة لعمل شق صغير بالقرب من القزحية. استخدم هذه الفتحة لعمل قطع محيطي كامل على طول حدود القزحية. يؤدي هذا إلى فصل الجزء الأمامي المحتوي على القزحية من العين عن بصلة العين الخلفية ، التي تحتوي على شبكية العين. قم بإزالة الجزء الزائد وانقل القزحية وبصلة العين إلى أطباق استزراع منفصلة.

أضف وسط ثقافة مناسب إلى الطبق الذي يحتوي على القزحية وفي لمبة العين. اكشط الأنسجة. تعمل القوة الميكانيكية على إرخاء الخلايا الظهارية ، وإطلاقها في الوسائط. استنشاق خلايا IPE و RPE المنفصلة. قم بزرعها في أطباق استزراع منفصلة واحتضانها حتى الاستخدام الآخر.

نظف الأنسجة العضلية والجلد المتبقي من العينين ، وعقم العينين بمحلول قائم على اليود ، واشطفهما باستخدام PBS.

لعزل خلايا IPE ، قم بإزالة العدسة وسحب القزحية ، كما هو موضح. بعد تحضير قزحية العين ، أضف 1 مليلتر من الوسط الكامل وعزل الخلايا عن طريق الخدش بماصة باستور مصقولة بالنار ، ثم عد الخلايا وبذرها. ضع الطبق في الحاضنة.

لعزل خلايا RPE ، قم بإزالة الجسم الزجاجي والشبكية من الجزء الخلفي ، وضع البصلة في طبق بتري. املأ المصباح ب 1 مليلتر وسط كامل. باستخدام ماصة باستور منحنية مصقولة بالنار، قم بإزالة خلايا RPE، واجمع معلق الخلية داخل المصباح باستخدام ماصة سعة 1,000 ميكرولتر، وانقلها إلى أنبوب سعة 1.5 ملليلتر لإعادة التعليق. ثم قم بحساب الخلايا وبذرها واحتضانها كما هو موضح سابقا.