الاستئصال الانتقائي بمساعدة الليزر للخلايا البطانية القرنية الخنزيرية: تقنية للحث على إصابة بطانة قرنية الخنازير المركزة لدراسات خارج الجسم الحي

تتكون الطبقة الأعمق من القرنية الخنازير - الجزء الأمامي اللاوعائي الشفاف - من خلايا بطانة القرنية ، أو CECs ، مدعومة بالغشاء القاعدي - غشاء Descemet ، أو DM. تحافظ CECs على شفافية القرنية والرؤية المثلى. أي ضرر يلحق بهم يمكن أن يؤثر على الرؤية.

لتلف CEC الانتقائي ، ابدأ بعين خنزير محصودة حديثا في وسط مناسب. قم بإزالة الأنسجة المحيطة. عالج العين بمطهر مناسب للقضاء على التلوث الميكروبي السطحي. بعد الغسيل الملحي ، افحص العين الأمامية بصريا لاستبعاد أي تشوهات قبل التشعيع بالليزر.

قم بتأمين العين في جهاز تثبيت مخصص أمام وحدة مصباح شق مجهزة بليزر بطول موجي معين. تصور طبقات القرنية الفردية. مع طاقة الليزر المناسبة وموضع نقطة التركيز ، قم بتوجيه نبضات الليزر إلى الطبقة البطانية للقرنية. تتسبب النبضات المركزة قصيرة المدة وعالية الطاقة في حدوث تمزق انتقائي في CEC من السطح المكشوف مع تجنب انتشار الحرارة ، وبالتالي حماية DM أو الأنسجة اللحمة.

إنشاء منفذ دخول قريب من الأطراف - تقاطع القرنية ، قم بحقن محلول لزج مرن في الغرفة الأمامية التي تحتوي على القرنية لتثبيتها وحماية CECs المتبقية. استئصال ونقل جزء القرنية المعالج بالليزر إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط ، بحيث يكون جانب CEC متجها لأعلى. يمكن استخدام نموذج إصابة بطانة القرنية خارج الجسم الحي لمزيد من الدراسات.

بعد الحصول على عيون الخنازير الطازجة من المسلخ المحلي ، ضع العينات في 4 درجات مئوية ، متوسطة كاملة. استخدم المقص لإزالة الأنسجة خارج الخلية ، وانقع العينين في محلول عيون بوفيدون اليود بنسبة 5٪ لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، ضع العينات المطهرة في PBS معقم في درجة حرارة الغرفة.

باستخدام جهاز التصوير المقطعي للتماسك البصري في المجال الطيفي ، قم بفحص العينين بحثا عن أمراض الجزء الأمامي الرئيسية ، مثل تندب القرنية والوذمة وغيرها من العتامة. بعد الفحص ، ضع العينين أمام وحدة المصباح الشقي المجهزة بليزر Nd: YAG بطول موجي يبلغ 1064 نانومتر ، وقطر بقعة بؤرية يبلغ 10 ميكرومتر في الهواء. حدد التكبير 12X ، وقم بتحويل الإضاءة لتصور طبقات القرنية الفردية.

بعد ضبط طاقة النبض ونقطة التركيز على المعلمات المناسبة للاستئصال الانتقائي للخلايا البطانية للقرنية ، قم بتطبيق عدة لقطات ليزر على الأنسجة. ثم ، تحت مجهر تشريح ، ضع بزل القرنية الشفاف بالقرب من طيفي الأطراف ، وقم بحقن اللزوجة المرنة لتثبيت الغرفة الداخلية. بعد ذلك ، استخدم تريفين 8 ملم لاستئصال القرنية المركزية المعالجة بالليزر ، ووضع القرنية المعزولة في بئر واحد من صفيحة 12 بئرا ، الجانب البطاني لأعلى. عندما يتم جمع كل القرنيات ، أضف 3 ملليلتر من الوسط الكامل إلى كل عينة جيدا ، واحتضن العينات لمدة تصل إلى ثلاثة أيام عند 37 درجة مئوية.