عزل الخلية البطانية الأبهرية الخنازير (pAEC): طريقة قائمة على الإنزيم لعزل الخلايا البطانية من الشريان الأورطي البطني الخنازير المحصودة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 4:50 دقيقة • July 8th, 2025
يتكون الشريان الأورطي - الشريان الرئيسي الذي ينقل الدم المؤكسج من القلب إلى الجسم - من ثلاث طبقات أو "سترات": البطى الداخلية ، والوسط الأوسط ، والوسط الخارجي. توجد الخلايا البطانية أو ECs في الجزء الداخلي كطبقة أحادية رقيقة ومستمرة فوق غشاء أساسي داعم يتكون من بروتينات هيكلية ، في المقام الأول الكولاجين.
لعزل ECs ، ابدأ بالشريان الأورطي الخنزير المحصود في طبق الاستزراع. استئصال نهاياتها وأي أنسجة ملتصقة محيطة لمنع تلوث الخلايا غير البطانية. اغسل الشريان الأورطي بمحلول يحتوي على مضادات حيوية لمنع نمو الميكروبات.
مرر خياطة جراحية معقمة عبر الشريان الأورطي واربط أحد أطرافها ، مع الحفاظ على الخيط داخل التجويف. قم بتأمين الطرف المربوط وسحب الخيط لقلب الشريان الأورطي تماما. هذا يعرض الإنتيما المحتوية على EC للهضم الأنزيمي. عالج الشريان الأورطي بمحلول كولاجيناز منخفض التركيز ودافئ مسبقا للحصول على نشاط الإنزيم الأمثل واحتضانه.
يكسر الكولاجيناز بروتينات الكولاجين الموجودة في الغشاء القاعدي الموجود تحت ECs ، مما يؤدي إلى تفككها. بعد الحضانة ، أضف عازلة مبردة لتعطيل إنزيمات الكولاجيناز.
اكشط السطح الأبهري الحممي برفق واشطفه بمحلول عازل لتحرير ECs في المحلول. الطرد المركزي هذا الحل لتكوير ECs. أعد تعليق الحبيبات في وسط مناسب. بذر معلق الخلية في قارورة ثقافة واحتضنها. تلتصق ECs بقاع القارورة و
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية