تزجيج أجنة الأرانب باستخدام القش المبرد: تقنية تبريد فائقة السرعة للحفاظ على أجنة الأرانب للتخزين طويل الأمد

تزجيج الأجنة هو تقنية حفظ تجميد فائقة السرعة تعمل على تبريد الأجنة بمعدلات عالية للغاية إلى درجات حرارة منخفضة للغاية ، مما يسهل تخزينها على المدى الطويل.

للبدء ، خذ أجنة الأرانب المحصودة في وسائط مناسبة. احتضان الأجنة بمحلول متوازن يحتوي على تركيزات منخفضة من المواد البردية المتغلغلة للخلايا - جلايكول الإيثيلين ، أو EG ، وثنائي ميثيل سلفوكسيد ، أو DMSO. ينتشر EG و DMSO عبر أغشية الخلايا ، ويحل محل جزيئات الماء داخل الخلايا ويمنع تكوين بلورات الجليد داخل الخلايا.

بعد ذلك ، قم باحتضان الأجنة بمحلول تزجيج يحتوي على تركيزات أعلى من EG و DMSO لتمكين الاختراق الكافي للمواد المجمدة بالتبريد وتدفق الماء الكافي داخل الخلايا ، مما يحمي الخلايا من تلف التجمد.

قم بإقران حامل قش مبرد معقم بموزع دقيق. باستخدام الموزع الدقيق ، املأ القشة بالوسائط المرغوبة إلى المستوى المناسب. بعد ذلك ، استنشق فقاعة هواء ، متبوعة بحجم ضئيل من محلول التزجيج المحتوي على الجنين ، وفقاعة هواء أخرى.

قم بشفط الوسائط مرة أخرى حتى يبلل الجزء الأول من الوسائط وبلمر سدادة القطن المطلية بالمسحوق ، مما يؤدي إلى إغلاق نهاية القش. أغلق الطرف الآخر بسدادة قش كارهة للماء. تساعد قطاعات الهواء والوسائط في عزل الأجنة داخل الناقل المغلق.

اغمر القش لفترة وجيزة في النيتروجين السائل عند -196 درجة مئوية. يضمن الناقل معدلات تبريد عالية ، وترسيخ الأجنة في مرحلة غير متبلورة تشبه الزجاج ، في حين أن الحجم المنخفض لمحلول التزجيج والمواد البردية المستخدمة يخفف من الإجهاد التناضحي. يمكن تخزين الأجنة المزججة ، مع تعليق النشاط الأيضي ، حتى الاستخدام.

للتزجيج الجنيني ، اغمر الأجنة في محلول متوازن لمدة دقيقتين ، تليها حضانة لمدة دقيقة واحدة في محلول التزجيج. في نهاية الحضانة ، قم بتحميل الأجنة في قش بلاستيكي صغير سعة 125 ميكرولترا ، وقم بإقران الطرف المغلق من القش بموزع دقيق مناسب سعة 1 ملليلتر. قاعدة شفط متوسطة تصل إلى ثلث طول القشة ، متبوعة بفقاعة هواء صغيرة.

بعد ذلك ، استخدم مجهريا مجسيما لشفط الأجنة في 40 ميكرولترا من محلول التزجيج ، متبوعا بفقاعة هواء صغيرة أخرى في وسط أساسي كاف لتحريك الجزء السائل الأول إلى الطرف القطني من القش الصغير. بعد ذلك ، أغلق الطرف المفتوح من القش الصغير بسدادة من القش ، واغمر القش الصغير مباشرة في النيتروجين السائل لتحقيق التزجيج ، وقم بتخزين القش الصغير في ديوار النيتروجين السائل.