JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 2:15 د • July 8th, 2025
الشفرات النانوية عبارة عن جزيئات اصطناعية تشبه الفيروسات بدون مادة وراثية فيروسية مغلفة ، مما يجعلها ناقلات مناسبة للبضائع الأجنبية في الخلايا المضيفة. يتم إنشاء هذه الشفرات النانوية باستخدام النواة الفيروسية القهقرية لفيروس سرطان الدم في الفأر المحاطة بغشاء ثنائي الطبقة الدهنية المشتق من الخلايا المنتجة حقيقية النواة المستخدمة لتجميع الشفرات النانوية في المختبر.
يحتوي اللب على إنزيم Cas9 المركب مع sgRNA الخاص بتسلسل الجينوم المستهدف. البروتينات الأساسية محاطة ببروتينات الغلاف التي تحتوي على مجال غشاء أو TM يمر عبر الطبقة الدهنية الثنائية. يرتبط TM بمجال سطح البروتين السكري خارج الخلية أو SU الذي يبرز من طبقة ثنائية الطبقة.
لاستخدام الشفرات النانوية لتحرير الجينات ، خذ مزرعة الخلايا المستهدفة الملتصقة واستكملها بمحلول الشفرة النانوية. في الثقافة ، يتعرف SU البارز للشفرة النانوية على المستقبل المقابل على سطح الخلية المضيفة ويرتبط به. هذا يؤدي إلى تعديلات في هيكل مجال SU ، مما يسهل إصداره.
تؤديهذه التغييرات إلى التغييرات التوافقية في مجال TM ، والذي يرتبط بعد ذلك بالغشاء المضيف. هذا الارتباط يجعل الشفرة النانوية بالقرب من الخلية المضيفة ، مما يسمح باندماج غشاء ثنائي الطبقة الفيروسي مع الغشاء المضيف ، ويتحرك اللب الفيروسي إلى السيتوبلازم.
بمجرد دخوله إلى الخلية ، يتفكك اللب ، ويطلق مركب Cas9-sgRNA الذي يمكنه إجراء تحرير الجينوم في موقعه المستهدف.
لنقل الخلايا المستهدفة باستخدام الشفرات النانوية ، استبدل وسط زراعة الخلية ب 500 ميكرولتر من الوسط الذي يحتوي على شفرات نانوية منقاة. بعد أربع إلى ست ساعات من حضانة الخلية ، استبدل الوسيط بالكمية الطبيعية من الوسط الطازج.