موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:48 دقيقة • July 8th, 2025
لإجراء نقل الجينات الهيدروديناميكية ، ابدأ بأخذ حقنة مملوءة بمحلول ملحي يحتوي على بلازميدات مؤتلفة تحمل الجين محل الاهتمام. بعد ذلك ، خذ نموذجا للفأر وقم بحقن كمية كبيرة من محلول البلازميد بسرعة في قاعدة الذيل ، مما يضمن حقن محلول البلازميد عن طريق الوريد في وريد الذيل.
يولد الحقن المضغوط لكمية كبيرة من البلازميدات قوة ميكانيكية تسمى القوة الهيدروديناميكية ، مما يزيد من الضغط داخل الأوعية الدموية في الوريد الأجوف السفلي - وهو وريد ينقل الدم غير المؤكسج إلى القلب.
يؤديحجم السائل الكبير إلى احتقان البطين الأيمن للقلب مما يجبر على انعكاس اتجاه الدم. تجبر هذه الخطوة محلول البلازميد على دخول الوريد الكبدي الذي يحمله إلى الكبد.
تتحرك البلازميدات داخل الجيوب الأنفية الكبدية - الفراغات في الكبد التي تصطف عليها الخلايا البطانية. تساعد زيادة حجم الدم البلازميدات على اختراق الطبقة البطانية ، مما يساعدها على الوصول بالقرب من خلايا الكبد المحيطة - خلايا الكبد.
يؤدي التدفق السريع لمحلول البلازميد إلى الضغط على غشاء خلية الخلايا الكبدية مما يولد مسام عابرة. تسهل هذه المسام امتصاص الخلايا للحمض النووي البلازميد. في وقت لاحق ، تغلق المسام الغشائية ، مما يحبس البلازميدات داخل خلايا الكبد.
يؤكد التعبير الناجح للجين ذي الأهمية في خلايا الكبد التعدي.
ابدأ بوزن الفئران ، ثم قم بإعداد محلول ملحي معقم يحتوي على 15 ميكروغراما لكل مليلتر من ناقلات الجمال النائم الخالية من السموم الداخلية الملحية و 1 ميكروغرام لكل مليلتر خال من السموم الداخلية pc-HSB5. قم بإعداد محلول كاف لحقن كل فأر بحجم 10٪ من وزن جسمه. املأ حقنة معقمة سعة 3 ملليلتر بالحجم المطلوب لماوس واحد ، وقم بإرفاق إبرة قياس 27.
بعد إضافة كمية مناسبة من المناديل الورقية لترك مساحة صغيرة للحركة ، ولكن مساحة كافية للتنفس ، أدخل الماوس في أداة تقييد مناسبة بها فتحات تنفس. قم بتسخين الذيل باستخدام مصباح الأشعة تحت الحمراء لمدة 30 إلى 60 ثانية ، مع المراقبة بعناية لعلامات ارتفاع درجة الحرارة ، مثل الحركة السريعة للذيل أو علامات الإثارة الأخرى ، ثم قم بتنظيف الذيل بمسحة كحولية.
أدخل الإبرة أفقيا تقريبا في أحد وعوري الذيل الجانبية بالقرب من قاعدة الذيل. إذا تم وضعه بنجاح، فقد تتدفق كمية صغيرة من الدم مرة أخرى إلى مخروط الإبرة. حقن الحجم الكلي في وريد الذيل في غضون 8 إلى 10 ثوان. بعد الحقن ، قم بإزالة الماوس على الفور من المصفاة. ضغط جرح الحقن بشاش معقم لمدة 30 ثانية على الأقل أو حتى يهدأ أي نزيف.
يعدالحقن الهيدروديناميكي الناجح لوريد الذيل أمرا بالغ الأهمية للتعداء ، ويعتمد بشكل خاص على سرعة الحقن وحجمه والوقت. لتسهيل الحقن في الوريد ، تأكد من عدم تعرض الفئران للإجهاد أو الجفاف في يوم الحقن.
بعد 30 إلى 60 دقيقة من السكن الفردي في قفص الاسترداد ، انقل الماوس مرة أخرى إلى قفصه الأصلي.