توصيل الجينات في المختبر بوساطة التثقيب الكهربائي: تقنية نبضة كهربائية لإدخال بلازميدات ترميز البروتين الفلورية في الخلايا المستنبتة

لتوصيل الحمض النووي البلازميد القائم على التثقيب الكهربائي إلى الخلايا العصبية الأولية ، ابدأ بتعليق الخلايا في وسط التثقيب الكهربائي المناسب. أضف الحمض النووي البلازميد المشفر للبروتين الفلوري لتحضير خليط التثقيب الكهربائي.

انقل خليط التثقيب الكهربائي برفق إلى كوفيت التثقيب الكهربائي ، وتجنب فقاعات الهواء التي يمكن أن تؤثر سلبا على كفاءة التثقيب الكهربائي. انقل الكوفيت إلى حامل الكوفيت الخاص بالمثقوب الكهربائي ؛ اضبط معلمات التثقيب الكهربائي. بدء التثقيب الكهربائي.

تتسبب النبضات الكهربائية القصيرة عالية الجهد المطبقة عبر غشاء الخلية في تراكم الشحنة التفاضلية على جانبي الغشاء ، مما يزيد من إمكانات الغشاء ، والجهد عبر غشاء الخلية.

عندما يتجاوز جهد الغشاء المستحث إمكانية انهيار الطبقة الدهنية الثنائية ، فإن الطبقة الدهنية الثنائية تزعزع استقرارها مع تغيير التكوين الموضعي ، وتشكل مسام عابرة محبة للماء على غشاء الخلية. توفر المسام ذات الحجم المناسب مسارا للحمض النووي البلازميدي لدخول سيتوبلازم الخلية.

عند الانتهاء من التثقيب الكهربائي ، يتم إعادة إغلاق الطبقة الدهنية الثنائية ، واستعادة سلامة طبقة ثنائية غشاء الخلية ، وبالتالي محاصرة الحمض النووي البلازميد. علاوة على ذلك ، خلال مرحلة دورة الخلية عندما يتفكك الغشاء النووي ، الغشاء ذو الطبقات المزدوجة المحيط بالنواة ، وينتقل الحمض النووي