حقن perivittelline القائم على ناقلات الفيروسات العدسية: طريقة لتحويل الجين المعني إلى بويضات فأر مخصبة أحادية الخلية

JoVE Encyclopedia of Experiments

التقنيات البيولوجية

0 مشاهدات • 4:16 د • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لإجراء التعدي ، خذ غرفة متخصصة تحتوي على بيض الفأر المخصب حديثا معلق في قطرة من الوسائط المناسبة. في هذه المرحلة ، تحتوي البويضة على بويضة مركزية كبيرة تحتوي على كل من النوى الأبوية والأم.

البويضة مغطاة بمنطقة الشفافة الغنية بالبروتين السكري ، وتحيط بها مجموعات مرتبة عن كثب من الخلايا الركامية المضمنة في المصفوفة خارج الخلية الغنية بحمض الهيالورونيك. الآن ، عالج البيض بإنزيم الهيالورونيداز الذي يهضم حمض الهيالورونيك. يؤدي هذا إلى فصل الخلايا الركامية ، مما يؤدي في النهاية إلى تعريض المنطقة الشفافة المحيطة بالبويضة.

ضع بويضة واحدة معالجة بالقرب من طرف الماصة المثبتة وقم بضغط الشفط لكبح موضعها. خذ إبرة حقن مجهرية ضيقة التجويف تحتوي على معلق ناقل فيروسي عدسي مصمم هندسيا يحمل جينا معدلا مغلفا داخل الغلاف الفيروسي. تتمتع هذه الفيروسات القهقرية بالقدرة الكامنة على الاندماج في جينوم المضيف.

بعد ذلك ، اخترق الإبرة من خلال المنطقة الشفافة للوصول إلى مساحة perivitelline - وهي مسافة بين المنطقة الشفافة وغشاء البلازما الداخلي. أدخل معلق ناقل الفيروسات العدسية في الفضاء المحيط واحتضانه لتسهيل التنبيغ - وهي عملية نقل جيني بوساطة الفيروس.

يندمج الناقل الفيروسي مع غشاء البويضة ، مما يسمح بإطلاق الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا في سيتوبلازم البويضات ، والذي يعكس النسخ إلى الحمض النووي مزدوج الشريطة. في النهاية ، يتكامل الحمض النووي في مواقع محددة في جينوم المضيف ، مما يؤدي إلى التعبير الجيني المعدل وراثيا.

في التحضير ، قم بالطرد المركزي المعلق الناقل الفيروسي المحضر عند 160 جم لمدة دقيقتين لتكوير الحطام الموجود غالبا في مخزون الفيروسات العدسية المجمد. في خزانة أمان من الفئة الثانية ، انقل المادة الطافية إلى أنبوب جديد سعة 0.5 مل. بعد ذلك، قم بتحميل 1 ميكرولتر من المادة الطافية في ماصة حقن، ثم قم بتوصيل ماصة الحقن بجهاز المعالجة الدقيقة على الجانب الأيمن، وقم بتوصيل الماصة المثبتة بجهاز المعالجة الدقيقة على الجانب الأيسر.

الآن ، قم بتوزيع 8 ميكرولترات من وسط M2 في وسط شريحة الاكتئاب ، وقم بتغطيتها بزيت البارافين الخفيف لتجنب التبخر. ثم ضع 20 بيضة في المواقع الضحلة في القطرة دون تكوين فقاعات. بعد ذلك ، تأكد من أن طرف ماصة الحقن مفتوح. إذا لم يكن الأمر كذلك، فاضغط على ماصة الحقن باستخدام الماصة المثبتة لفتحها، ثم اضبط الحاقن على الحقن لمدة 20 ثانية.

الآن ، باستخدام الماصة القابضة والضغط اليدوي ، استنشق بويضة مخصبة تحتوي على نوتين وجسمين قطبين. بعد ذلك ، باستخدام ماصة الحقن ، قم بحقن المساحة المحيطة بالبويضة.

لا تلمس غشاء البلازما. اضبط الضغط بحيث تمتلئ مساحة perivitelline بالمحلول. يجب ألا يتجاوز الضغط 600 hectopascals. مباشرة بعد حقن 20 بيضة ، انقل الدفعة إلى حمام من وسط M16 مسخن مسبقا ، واحتضانها لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل زرعها.

12:40

عالية الإنتاجية إبر دقيقة جدا لقنفذ البحر بيضات ملقحة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:03

بيض المخصب إيصال الجينات لينتيفيرال ساعد الليزر للماوس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:07

جيل من الفئران المعدلة وراثيا باستخدام نهج ناقلات لينديفيس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

22:02

نقل الجينات إلى الأذن الداخلية عن طريق تطوير ماوس في الجسم الحي Electroporation

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:31

توصيل الجينات الفيروسية العدسية بمساعدة الليزر: تقنية لاختراق البويضات المخصبة للفأر لتسهيل توصيل الجينات الفيروسية العدسية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:06

حقن المجسم من الرنا الميكروي، معربا عن Lentiviruses إلى CA1 الحصين ماوس المنطقة وتقييم حصيلة السلوكية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:04

الماوس الجينوم الهندسية عن طريق Nucleases مصمم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:43

Loss- ونهج كسب من وظيفة إلى التحقيق في خلية المبكر مصير محددات في سابق للانغراس أجنة الفئران

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:19

جيل من الفئران المعدلة وراثيا من خلال ميكروينجكتيون من البويضات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:21

لينتيفيرال توسط إنتاج فئران المحورة وراثيا: طريقة بسيطة وذات كفاءة عالية للدراسة مباشرة من مؤسسي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026