حقن perivittelline القائم على ناقلات الفيروسات العدسية: طريقة لتحويل الجين المعني إلى بويضات فأر مخصبة أحادية الخلية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:16 دقيقة • July 8th, 2025
لإجراء التعدي ، خذ غرفة متخصصة تحتوي على بيض الفأر المخصب حديثا معلق في قطرة من الوسائط المناسبة. في هذه المرحلة ، تحتوي البويضة على بويضة مركزية كبيرة تحتوي على كل من النوى الأبوية والأم.
البويضة مغطاة بمنطقة الشفافة الغنية بالبروتين السكري ، وتحيط بها مجموعات مرتبة عن كثب من الخلايا الركامية المضمنة في المصفوفة خارج الخلية الغنية بحمض الهيالورونيك. الآن ، عالج البيض بإنزيم الهيالورونيداز الذي يهضم حمض الهيالورونيك. يؤدي هذا إلى فصل الخلايا الركامية ، مما يؤدي في النهاية إلى تعريض المنطقة الشفافة المحيطة بالبويضة.
ضع بويضة واحدة معالجة بالقرب من طرف الماصة المثبتة وقم بضغط الشفط لكبح موضعها. خذ إبرة حقن مجهرية ضيقة التجويف تحتوي على معلق ناقل فيروسي عدسي مصمم هندسيا يحمل جينا معدلا مغلفا داخل الغلاف الفيروسي. تتمتع هذه الفيروسات القهقرية بالقدرة الكامنة على الاندماج في جينوم المضيف.
بعد ذلك ، اخترق الإبرة من خلال المنطقة الشفافة للوصول إلى مساحة perivitelline - وهي مسافة بين المنطقة الشفافة وغشاء البلازما الداخلي. أدخل معلق ناقل الفيروسات العدسية في الفضاء المحيط واحتضانه لتسهيل التنبيغ - وهي عملية نقل جيني بوساطة الفيروس.
يندمج الناقل الفيروسي مع غشاء البويضة ، مما يسمح بإطلاق الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا في سيتوبلازم البويضات ، والذي يعكس النسخ إلى الحمض النووي مزدوج الشريط
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية