موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:31 دقيقة • July 8th, 2025
توصيل الجينات الفيروسية بمساعدة الليزر هو تقنية لنقل الجينات المعدلة وراثيا إلى نظام مضيف.
لإنتاج الفئران المعدلة وراثيا ، ابدأ ببيض مخصب معزول للفأر في وسط استزراع مناسب. ضع طبق المزرعة المخصب المحتوي على البيض على مرحلة المجهر المثبت مسبقا بجهاز ليزر ومتصل ببرنامج تحكم. راقب في التكبير المناسب.
البويضات المخصبة محاطة بالمنطقة الشفافة ، وهي طبقة واقية من البروتين السكري تحيق جزيئات الفيروسات العبقية. لاختراق هذا الحاجز ، قم بتشغيل جهاز الليزر وتأكد من أن مؤشر LED لليزر مرئي فوق المنطقة الشفافة. باستخدام برنامج التحكم ، أطلق الليزر. اضبط مدة إطلاق النار وفقا لقطر الثقب المطلوب.
ضع البيض في حاضنة للتعافي. بعد حضانة قصيرة ، قم بإزالة البويضات وإضافة جزيئات الفيروس العدسي التي تحمل الجين محل الاهتمام وعلامة الفلورسنت القابلة للتحديد.
مع ثقبالمنطقة الشفافة ، ينتشر الفيروس العدسي بسهولة نحو غشاء خلية البويضة ويدخل عن طريق الالتقام الخلوي. يتفكك الفيروس العدسي ، ويطلق الحمض النووي الريبي الخاص به ، والذي ، عند معالجته بالتتابع في حمض نووي مزدوج الشريطة ، يدخل النواة المضيفة ، ويدمج الجينات الغريبة في جينوم المضيف.
احتضان البيض والسماح له بالتطور إلى كيسات أريمية. زرع الأكياس الأريمية في إناث الفئران المتزاوجة. بمجرد اكتمال الحمل ، استرجع الجراء وقم بتحليلها بحثا عن وجود الجينات المعدلة وراثيا.
أثناء وجود البيض في الحاضنة ، قم بإعداد ومعايرة ليزر XYClone وفقا لتوصيات الشركة المصنعة. عندما يصبح البيض جاهزا ، ضع أول صفيحة إسقاط على مرحلة مجهر الليزر ، وركز المنطقة الشفافة يدويا. بعد التأكد من أن ضوء الليزر LED مرئي من خلال الهدف ، حرك مرحلة المجهر لاستهداف المنطقة باستخدام ليزر LED ، واستخدم برنامج الكمبيوتر لضبط ليزر XYClone على 250 ميكروثانية.
اضبط حجم ضوء LED على الأبعاد المناسبة ، وقم بثقب المنطقة الشفافة لكل بيضة ثلاث مرات بالليزر لإنتاج ثلاثة ثقوب بحجم 10 ميكرومتر.
من الأهمية بمكان إجراء التثقيب بسرعة ولكن بحذر ، حيث لا يمكن للبويضات المخصبة الاحتفاظ بها خارج الحاضنة لمدة تزيد عن 15 دقيقة.
ثم أعد البيض المثقوب إلى الحاضنة لمدة ساعتين أخريين. في نهاية الحضانة الثانية ، عالج قطرة KSOM سعة 50 ميكرولتر ب 2 ميكرولتر من فيروس العدسات المركز دون خلط ، وأعد البيض إلى الحاضنة لمدة أربعة أيام. عندما تتطور البويضات إلى كيسات أريمية ، استخدم جهاز نقل الأجنة غير الجراحي لإيداع ما يقرب من 10 إلى 15 جنينا في وحوالي 2 ميكرولتر من KSOM.
بعد 17 يوما من نقل الجنين، اسمح للفأر الحامل بالولادة بشكل طبيعي أو جمع حديثي الولادة عن طريق الولادة القيصرية حسب الضرورة.