JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 3:02 د • July 8th, 2025
لنقل الخلايا المضيفة مع الحمض النووي الريبي الذي يحتوي على نواقل فيروسات قهقرية ، خذ أنبوبا يحتوي على ناقلات معبأة في وسائط مناسبة. يحتوي كل ناقل على قفيصة فيروسية تحتوي على مكمل الحمض النووي الريبي للجين المعدل ليتم دمجها في جينوم المضيف والإنزيمات الفيروسية المهمة. تحيط طبقة ثنائية الدهون بالقفيصة لتسهيل الدخول إلى الخلية المضيفة.
أضف النواقل في وجود كاشف تعداء مناسب إلى بئر صفيحة استزراع تحتوي على تعليق الخلية المضيفة. غطي اللوحة. جهاز طرد مركزي بسرعة منخفضة للسماح بنقل الدوران. هذا يجعل الناقل الفيروسي أقرب إلى سطح الخلية المضيفة ، مما يزيد من كفاءة النقل.
في الوقت نفسه ، تعمل التعدد المتعدد في كاشف التعدي على تحييد الشحنات السالبة على الفيروس والخلية المضيفة ، مما يعزز الامتصاص الفيروسي على الخلايا المستهدفة.
وبالتالي ، فإن المستقبلات الموجودة على سطح الفيروس تسهل اندماجه مع الغشاء المضيف. يدخل القفيصة الفيروسية إلى الخلية ويتمزق ، ويطلق الحمض النووي الريبي المعدل وراثيا والإنزيمات الفيروسية في السيتوبلازم.
داخل السيتوبلازم ، يقوم النسخ العكسي الفيروسي بتحويل الحمض النووي الريبي إلى حمض نووي تكميلي أحادي الشريطة ، ثم يغيره لاحقا إلى الحمض النووي الفيروسي ثنائي الشريطة. يدخل الحمض النووي الناتج إلى النواة. يتوسط إنزيم إنتگراز الفيروسي في دمج الحمض النووي الفيروسي في جينوم المضيف ، مما يؤدي إلى انتقال الخلايا.
اجمع المادة الطافية الفيروسية الطازجة من خط الخلايا المنتجة للفيروس. في هذه المرحلة ، يجب أن تكون الخلايا متباعدة جيدا مع مورفولوجيا محددة. بعد ذلك ، قم باستنشاق أعلى 2 ملليلتر من الوسط بعناية من كل بئر من الصفيحة المكونة من 6 آبار تحتوي على خلايا نخاع العظام. تجنب شفط خلايا نخاع العظم التي تتركز عادة في منتصف البئر.
أضف 3 ملليلتر من المادة الطافية الفيروسية المكملة حديثا إلى كل بئر من الصفيحة المكونة من 6 آبار التي تحتوي على خلايا نخاع العظام. بعد لف الألواح بالبلاستيك ، كرر نقل الدوران ، ثم ضع الألواح غير المغلفة في حاضنة زراعة الأنسجة. بعد 24 ساعة في اليوم الثالث ، قم بإزالة واستبدال 2 مل من الوسائط من الآبار.