تلطيخ أحمر النيل: تقنية للكشف عن الدهون المحايدة داخل الخلايا وقياسها في الطحالب

الطحالب هي كائنات حية مائية لعملية التمثيل الضوئي تنتج مجموعة متنوعة من الدهون ، والتي تعتبر الدهون المحايدة ضرورية لإنتاج وقود الديزل الحيوي.

لاكتشاف الدهون المحايدة وتحديدها كميا ، امزج الحجم الأمثل من تعليق الطحالب والإيثانول في صفيحة ميكروتيتر سوداء جيدا. يصبح جدار الخلية الطحالبية وغشاءها ، اللذان يمنعان معظم البقع من الاختراق ، قابلين للاختراق عند تعرضهما للإيثانول. بعد ذلك ، امزج الإيثانول مع صبغة الفلورسنت القابلة للذوبان في الدهون - أحمر النيل. أضف هذا الخليط إلى البئر المحتوي على الطحالب.

ضع لوحة الميكروتيتر في مقياس الطيف الضوئي. ضع برنامجا يضمن الحضانة مع الاهتزاز المتقطع لتسهيل التفاعل بين الصبغة والطحالب.

نظرا لأن النيل الأحمر كاره للماء ، فلا يمكنه اجتياز السيتوبلازم بسهولة. المذيبات مثل الإيثانول ، عندما تقترن بأحمر النيل ، تحشد الصبغة وتساعدها على الوصول إلى الأجسام الدهنية المنتشرة في السيتوبلازم. ثم يخترق النيل الأحمر الأجسام الدهنية ويذوب هناك ، وبالتالي يلطخ الدهون.

تظهر الخلايا التي تعاني من نقص الدهون على شكل حلقات فلورية ذات أجسام داكنة ، بينما تظهر الخلايا الغنية بالدهون توهجا برتقاليا أحمر ساطعا حيث تتراكم الأجسام الدهنية.

بعد تلطيخ الخلايا ، قم بتعريضها لطول موجي يثير الدهون المحايدة إلى أقصى حد. سجل التألق الناتج وربطه بمنحنى المعايرة لتحديد الدهون المحا