تلطيخ سلبي قائم على الكبسولة لعينات الفيروسات على شبكات TEM: تقنية تلطيخ المعادن الثقيلة لتصور البنية التحتية للفيروسات المغلفة
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:50 دقيقة • July 8th, 2025
للتلوين السلبي للفيروسات المغلفة ، ابدأ بالتعليق الفيروسي المطلوب. احتضان الفيروسات باستخدام الجلوتارالديهايد ، وهو مثبت كيميائي. عند الاختراق ، يربط الجلوتارالديهايد البروتينات الفيروسية والأحماض النووية ، مما يؤدي إلى تعطيل الفيروسات مع الحفاظ على التشكل ، وبالتالي تسهيل التعامل الآمن مع الفيروسات. انقل هذا الخليط إلى طبق متعدد الآبار.
قم بإرفاق المجهر الإلكتروني للإرسال ، TEM ، الشبكات التي تحتوي على كبسولة بماصة عبر قارنة. باستخدام الماصة، استنشق الخليط المثبت للفيروسات في الكبسولة. احتضن مجموعة الماصة حتى تمتص الفيروسات على أسطح الشبكة.
انزع الخليط. اغسل الكبسولة وإزالة الفيروسات والمثبتات غير الملتصقة. ماصة محلول من أسيتات اليورانيل ، وهي صبغة معدنية ثقيلة ، في الكبسولة. احتضن لتمكين البقعة من الاتصال بالفيروسات.
ترتبط أيونات اليورانيل ببروتينات سكري غشائية معينة وفوسفوليبيدات على الأسطح الفيروسية. يمكن للأيونات اختراق الفيروسات والارتباط ببروتينات النوكليوكابسيد التي تحيط بالجينوم. يؤدي هذا الارتباط إلى تراكم أيونات المعادن الثقيلة وترسب حول الفيروس والهياكل الفيروسية المحددة.
افصل الكبسولة. قم بإزالة البقع الزائدة من الشبكات وجففها في الهواء.
أثناء التصوير TEM ، تعبر حزم الإلكترون عالية الطاقة الفيروس ، مما يتسبب في تشتت المناطق الملطخة بالإلكترونات الكثيفة بالإلكترونات في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية