JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 2:27 د • July 8th, 2025
بالنسبة لتلطيخ الغضروف ، ابدأ بقسم غضروف مثبت بالفورمالين ومدمج في البارافين من فأر قتل رحيم.
أولا ، اغمر العينة في بديل الزيلين - وهو عامل تطهير غير خطير يزيل شمع البارافين ويكشف الأنسجة المجففة. بعد ذلك ، عالج العينة بتركيزات منخفضة من الإيثانول لإعادة ترطيب الأنسجة للتلوين اللاحق.
الآن ، قم بتلطيخ العينة بالهيماتوكسيلين الحديدي من Weigert - وهي بقعة عضوية تحتوي على أيونات الحديدية - واحتضانها لفترة وجيزة. تشكل جزيئات الهيماتوكسيلين مجمعات مع أيونات الحديدية وتخترق الخلية. تعمل الأيونات الحديدية كمادة لاذعة وتسهل ارتباط الهيماتوكسيلين بالأحماض النووية ، مما يضفي عليها اللون الأزرق.
بعد ذلك ، عالج العينة بالصبغة الخضراء السريعة - بقعة مضادة ترتبط بالنسيج الضام وتضفي لونا أخضر. بعد ذلك ، عالج العينة بمحلول حمض الأسيتيك لتثبيت جزيئات الصبغة. أخيرا ، قم بتلطيخ العينة بالبرتقال السافرانين - صبغة كاتيونية - واحتضنها.
تهاجر جزيئات السافرانين موجبة الشحنة نحو البروتيوغليكان سالب الشحنة في الغضروف وترتبط بها ، مما يضفي لونا أحمر. بعد ذلك ، قم بتركيب الشريحة في وسط من الراتنج وتصورها تحت المجهر.
يظهر الغضروف السليم أحمر بشكل مكثف بسبب المصفوفة خارج الخلية الغنية بالبروتيوغليكان ، بينما يظهر الغضروف غير الصحي أقل احمرارا مع علامات تلف الأنسجة.
لإجراء تلطيخ Safranin-O ، قم أولا بإزالة الشرائح في الأوكسيلين لمدة ثلاث إلى خمس دقائق ، مع تكرار حمام الأوكسيلين مرتين. ثم قم بترطيب الشرائح في تدرج الإيثانول ، وينتهي بالماء المقطر. بعد ذلك ، ضع الشرائح من خلال محلول Hematoxylin الحديدي من Weigert ، ومحلول Fast Green بنسبة 0.05٪ ، ومحلول حمض الأسيتيك بنسبة 1٪ ، ومحلول Safranin-O بنسبة 0.1٪. الآن ، قم بتركيب الشرائح باستخدام وسيط راتنجي.