موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 2:50 دقيقة • July 8th, 2025
تتكون الأعصاب الطرفية من محاور محاطة بخلايا شوان تلتف حول المحاور بطبقات متعددة من أغشية الخلايا الغنية بالدهون ، وتشكل غمد المايلين.
لتصور الأعصاب الطرفية ، ابدأ بشريحة زجاجية تحمل قسما ثابتا من العصب المحيطي للفئران المعالج برباع أكسيد الأوزميوم الثابت المدمج في الراتنج. تساعد الأقسام المدمجة في الراتنج في الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة.
يتسبب العلاج برباع أكسيد الأوزميوم في ترسب الأوزميوم المعدني في الطبقة الدهنية من غمد المايلين في موقع الأنسجة.
محلول قلوي ماصة من التولودين الأزرق فوق قسم الأنسجة. جفف الشريحة عند درجة حرارة مناسبة. تسهل الظروف القلوية والحرارة اختراق التولودين الأزرق عبر الراتنج في قسم الأنسجة.
التولودين الأزرق ، كونه صبغة كاتيونية ، يرتبط بمجموعات الفوسفات سالبة الشحنة على الحمض النووي ويتكامل أيضا بين أزواج قواعد الحمض النووي في نوى خلايا شوان. بالإضافة إلى ذلك ، ترتبط الصبغة بالحمض النووي الريبي في السيتوبلازم ، خارج غمد المايلين.
أضف محلولا متصاعدا فوق قسم العصب الملطخ وقم بتغطيته بغطاء لتحضير الأنسجة للتصوير. تحت المجهر الضوئي ، تظهر طبقات غمد المايلين باللون الأسود مع هياكل ألياف عصبية نخاعية محددة بعد معالجة الأوزميوم ، بينما تظل المحاور غير ملطخة.
تظهر نوى خلايا شوان والسيتوبلازم ظلالا مختلفة من اللون الأزرق بسبب الخاصية المتبدلة اللون للصبغة ، مما يسهل تصور مورفولوجيا المحور العصبي ودرجة تكوين النخاع في الأعصاب الطرفية.
لتلطيخ الأقسام العصبية، استخدم ماصة بلاستيكية أو ماصة دقيقة لإضافة قطرة من محلول التولودين الأزرق في الجزء العلوي من الأقسام العصبية. بعد 20 إلى 30 ثانية ، اشطف كل محلول التولودين الأزرق الفائض ، عن طريق غمس الشرائح برفق في وعاء من الماء منزوع الأيونات ، وكرر ذلك من 3 إلى 4 مرات حتى تصبح الأقسام واضحة.
جفف الشرائح لمدة 15 دقيقة على الأقل عند 60 درجة مئوية ، أو طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. بعد التجفيف ، أضف وسط التثبيت العادي ، وقم بتغطية الأقسام بغطاء. أخيرا ، افحص الأقسام المثبتة تحت المجهر الضوئي. يوصى باستخدام عدسة غمر بالزيت بمعدل 100X للحصول على صور مفصلة لحساب نسب g.