تلطيخ البنفسجي الكريستالي: تقنية لتصور الخلايا السرطانية المقاومة للأدوية باستخدام فحوصات تكوين المستعمرة

في مجموعة الخلايا السرطانية غير المتجانسة ، فإن العلاج بدواء مضاد للسرطان من شأنه أن يقتل معظم الخلايا ، لكن الخلايا المقاومة للأدوية تبقى على قيد الحياة ، مما يؤدي إلى فشل العلاج.

لتحديد نسبة الخلايا المقاومة للأدوية ، قم بزرع مجموعة خلايا سرطانية غير متجانسة في صفيحة متعددة الآبار. احتضان لتسهيل التصاق الخلايا. أضف تركيزا متزايدا لمحلول دوائي مناسب مضاد للسرطان.

يتسبب التفاعل مع جزيئات الدواء في موت الخلايا الحساسة ، وبالتالي انفصالها عن ألواح الزراعة. في المقابل ، تعيش الخلايا المقاومة للأدوية وتظل ملتصقة باللوحة.

استنشق الوسائط المستهلكة لإزالة الخلايا المنفصلة. أضف وسائط جديدة خالية من الأدوية واحتضن الطبق في ظل الظروف الفسيولوجية. تتكاثر الخلايا المقاومة للأدوية وتشكل مستعمرات الورم. الآن ، أضف محلول تلطيخ البنفسجي الكريستالي إلى المستعمرات واحتضنها.

البنفسجي الكريستالي ، صبغة أرجوانية اللون ، نفاذة للغشاء ، موجبة الشحنة تدخل الخلايا وتربط البروتينات الأنيونية والحمض النووي ، وبالتالي تضفي لونا أرجوانيا على الخلايا.

بعد ذلك ، أضف الإيثانول لإذابة البقعة غير المتفاعلة. اغسل لإزالة أي بقع زائدة وجفف اللوحة بالهواء.

تظهر المستعمرات المقاومة للأدوية على شكل نقاط أرجوانية. احسب عدد المستعمرات الملونة في كل بئر. تمثيل النسبة المئوية لصلاحية الخلية على رسم بياني لتحديد نسبة الخلايا