موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 5:03 دقيقة • July 8th, 2025
تلطيخ الفضة الفلورية للبروتينات في المواد الهلامية متعددة الأكريلاميد مجسات الفلورية لاكتشاف البروتينات وتحديدها.
ابدأ بهلام بولي أكريلاميد مع البروتينات ، مفصولة إلى نطاقات من خلال الرحلان الكهربائي. انقع في خليط مثبت من الإيثانول وحمض الأسيتيك ، مما يمنع العصابات من الانتشار عن طريق تغيير طبيعة البروتينات.
اغسل الجل لإزالة بقايا حمض الأسيتيك والإيثانول. اغمر الجل في وصمة عار نترات الفضة. ترتبط أيونات الفضة بقوة بالمجموعات سالبة الشحنة في البروتينات.
احتضن في الظلام. اشطف الجل بالماء فائق النقاء لإزالة المجمعات الأيونية الفضية غير المربوطة.
اغمر الجل في محلول متطور يحتوي على مسبار فلوروجيني متعدد المكونات - TPE-4TA. يستهدف هذا المسبار الأنيوني أيونات الفضة المرتبطة بالبروتين ، مكونا مجاميع غير قابلة للذوبان تنشط الخصائص الفلورية للمسبار ، وبالتالي تضفي الفلورة.
نظرا لأن تنشيط التألق يعتمد على التجميع ، فإن المجسات غير المنضمة لا تصدر أي إشارة ، مما يتيح تلطيخ البروتين الكلي مع انخفاض انبعاث الخلفية.
احتضن الجل في الظلام مع تحريض لطيف ، مما يضمن تطورا كاملا للفلوروجينيك. انقل الجل في مخزن مؤقت لإزالة المجسات غير المقيدة. أخيرا ، قم بتصوير الجل للحصول على شدة إشارة النطاق. ارسم شدة إشارة التألق مقابل منحنى البروتين القياسي لحساب الكمية الإجمالية للبروتينات في العينة.
بعد الرح
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية