تلطيخ حمض الفوسفاتيز المقاوم للطرطرات: تقنية في المختبر للكشف عن ناقضات العظام المستنبتة المحتوية على إنزيم TRAP

ناقضات العظام عبارة عن خلايا كبيرة على شكل قبة ومتعددة النوى توجد على سطح العظام. تحتوي هذه الخلايا على العديد من الحبيبات السيتوبلازمية الغنية بحمض الفوسفاتيز المقاوم للطرطرات ، أو TRAP - إنزيم بروتين معدني يفرز من الحدود المكشكشة لناقضات العظم في أنسجة العظام. يهضم هذا الإنزيم المصفوفة خارج الخلية ويذيب البلورات المعدنية ، مما يسهل ارتشاف العظام.

للكشف عن حبيبات TRAP كعلامات كيميائية خلوية لناقضات العظم ، خذ طبقا مزرعيا يحتوي على ناقضات العظم الملتصقة. أضف محلول تلطيخ TRAP إلى الخلايا. يتكون هذا المحلول من الركيزة - مشتق يحتوي على الفوسفات وحمض الطرطريك في مخزن مؤقت مكمل بملح الديازونيوم.

أضف حمض الأسيتيك إلى هذا المحلول للحفاظ على درجة الحموضة الحمضية اللازمة لتلوين TRAP. احتضان الخلايا في الظلام عند درجة حرارة فسيولوجية للحصول على نشاط إنزيم TRAP الأمثل.

يدخل محلول التلوين إلى ناقضات العظم ، حيث يثبط حمض الطرطريك نشاط التحلل المائي لفوسفاتيز حمض الطرطرات الحساس في الخلايا الأخرى.

في الوقت نفسه ، يقوم TRAP بتحلل الركيزة المضافة لإزالة مجموعة الفوسفات. تتزاوج الركيزة المتحللة بملح الديازونيوم من محلول التلوين لتشكيل مركب صبغة غير قابل للذوبان بلون كستنائي اللون. يترسب هذا المركب على شكل حبيبات في مواقع النشاط الأنزيمي.

صور الخلايا تحت المجهر. يؤكد ترسب حبيبات الصبغة المارونية داخ