موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:37 دقيقة • July 8th, 2025
بانيات العظم هي خلايا مكونة للعظام تفرز حويصلات صغيرة في مصفوفة خارج الخلية ، ECM. تم تجهيز هذه الحويصلات ، التي تسمى حويصلات المصفوفة ، بناقلات وإنزيمات غشائية تمكن من دخول أيونات الكالسيوم والفوسفات ، وتشكيل بلورات معدنية بداخلها. عندما تتراكم البلورات ، فإنها تخترق غشاء الحويصلة لتشكيل عقيدات معدنية في ECM ، وتشكل كثافة المعادن في العظام.
لتصور التمعدن ، ابدأ بخلايا بانيات العظم على سقالة متوافقة حيويا في وسط نمو مناسب. تلتصق بانيات العظم بالسقالة وتستخدم عوامل النمو من الوسط لإفراز حويصلات المصفوفة التي تشكل لاحقا عقيدات معدنية في ECM.
استنشق وسط المزرعة واشطف الخلايا لإزالة أي آثار للوسائط. عالج الخلايا بمحلول الفورمالين ، مما يحفز ربط ECM وتثبيته والحفاظ على بنية الأنسجة. اغسل الخلايا لإزالة أي فورمالين متبقي.
بعد ذلك ، أضف محلول تلطيخ Alizarin Red واحتضان الثقافة. ترتبط جزيئات الصبغة بالعقيدات المعدنية وترتبط بالكالسيوم ، وهو معدن عظمي رئيسي ، ويشكل مجمعات ملطخة كبيرة.
استنشق محلول التلوين واغسله جيدا لإزالة أي صبغة غير مرتبطة. عند ملاحظتها تحت المجهر ، تظهر الرواسب المعدنية الغنية بالكالسيوم على شكل عقيدات حمراء زاهية في ECM ، مما يشير إلى التمعدن بواسطة بانيات العظم.
وسط استزراع الشفط من بانيات العظم الأولية ، بعد 14 يوما من إضافة وسط التمعدن العظمي. اشطفها مرتين باستخدام
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية