تلطيخ الفضة للجليكوزامينوجليكان الكبريت: طريقة تلطيخ لتصور الجليكوزامينوجليكان الكبريتات في المواد الهلامية بولي أكريلاميد

الجليكوزامينوجليكان الكبريتات ، GAGs ، عبارة عن عديد السكاريد الخطي الطويل ، سالب الشحنة ، مع سلاسل وحدة ثنائية السكاريد المتكررة الكبريتات في مواقع مميزة ، موجودة بأطوال متفاوتة.

لتصور GAGs المعزولة ذات الكبريتات ذات الأهمية التي تختلف في طول السلسلة في هلام بولي أكريلاميد بعد الرحلان الكهربائي ، قم بإزالة الجل بعناية من الكاسيت الخاص به. اشطفها بالماء منزوع الأيونات ، وإزالة قطع الجل المرفقة التي قد تتداخل مع تلطيخها.

عالج بمحلول أزرق ألسيان حمضي. في ظل الظروف الحمضية ، يتفاعل اللون الأزرق Alcian ، وهو صبغة كاتيونية متعددة التكافؤ مع ذرة نحاسية في الوسط ، على وجه التحديد مع GAGs ذات الكبريتات سالبة الشحنة عبر التفاعلات الأيونية ، مما يشكل مركبا أزرق عميقا غير قابل للذوبان في الماء.

اغسل الجل بالماء منزوع الأيونات والميثانول ، وقم بإزالة أي بقعة متبقية. احتضان الجل بمحلول نترات الفضة القلوية. في ظل الظروف القلوية ، توفر GAGs الكبريتية المرتبطة باللون الأزرق من Alcian مواقع لأيونات الفضة موجبة الشحنة للارتباط وتشكيل معقد.

عالج الجل في محلول نامي يحتوي على الفورمالديهايد وحمض الستريك. يخفض حامض الستريك درجة الحموضة المحلية للحصول على النشاط الأمثل للفورمالديهايد ، مما يقلل من أيونات الفضة إلى الفضة المعدنية غير القابلة للذوبان داخل شظايا GAG الكبريتية ، مما يؤدي إلى تضخيم إشارة Alci