موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 2:42 دقيقة • July 8th, 2025
تتكون البروتيوغليكان من بروتين أساسي متصل تساهميا بسلاسل الجليكوزامينوجليكان الكبريتية.
لتصور البروتيوغليكان ، ابدأ بالسقالات القائمة على الكولاجين - الركيزة البوليمرية المسامية - وقم بزرع الخلية الجذعية الوسيطة ، أو MSC ، المعلقة عليها. يوفر هذا الدعم الهيكلي للخلايا الجذعية الجذعية ويسمح لها بالنمو على السطح وكذلك داخل تجاويف السقالات.
عالج التركيبات في وسط تمايز غضروفي يحتوي على عوامل نمو تحويلية تدفع تحويل الخلايا الجذعية الجذعية إلى خلايا غضروفية ناضجة - خلايا غضروفية. تفرز الخلايا الغضروفية الناضجة البروتيوغليكان الذي يشكل شبكة مع الكولاجين في السقالة.
خذ قسما معدا من البناء المحمل بالخلايا الغضروفية. أضف محلولا حمضيا من وصمة عار ألسيان الزرقاء مكملا بهيدروكلوريد غوانيديوم واحتضانه. أثناء الحضانة ، يقوم هيدروكلوريد الجوانيدين في محلول الصبغة بفصل أي مجاميع بروتيوغليكان لتحسين التلوين.
بعد ذلك ، ترتبط الجليكوزامينوجليكان سالبة الشحنة من البروتيوغليكان بجزيئات صبغة الألسيا الزرقاء الموجبة الشحنة المحتوية على النحاس ، مما ينتج عنه رواسب زرقاء.
بعد ذلك ، اغمر الشريحة في محلول إزالة البقع يحتوي على كلوريد المغنيسيوم. تتنافس أيونات المغنيسيوم مع جزيئات الصبغة الموجبة الشحنة لمواقع الارتباط على الجليكوزامينوجليكان ، وبالتالي تمنع الإفراط في التلوين.
صور القسم. يؤكد اللون الأزرق وجود البروتيوغليكان في العينة
لإجراء التمايز الغضروفي من جهاز طبي على شكل إسفنجة يتكون من الكولاجين المجفف بالتجميد من النوع 1 ، قم بقطع مكعبات 3 ملليمترات لكل جانب. قم ببذور الخلايا الجذعية الجذعية فوق المكعبات بتركيز 4 × 106 خلايا / مل.
بعد السماح للخلايا بالالتصاق بالمكعبات لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، حافظ على تركيبات MSC-collagen في وسط غضروفي ، كما هو موضح في بروتوكول النص. أضف محلول ألكيان الأزرق 0.4٪ إلى الأقسام ، واحتضنه طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
في اليوم التالي ، استخدم 40٪ DMSO و 0.05 مولار كلوريد المغنيسيوم لغسل الخلايا لمدة 30 دقيقة قبل استخدام اللون الأحمر السريع النووي لمواجهة تلطيخ الخلايا.