تلطيخ ماسون جولدنر ثلاثي الألوان: تقنية لتصور الكولاجين في أقسام القلب للكشف عن تليف القلب والأوعية الدموية

ترسيب الخلايا الليفية القلبية المنشطة بالإجهاد الكولاجين الزائد في المناطق المصابة ، وهي حالة تسمى التليف ، مما يضعف وظائف القلب.

لتصور مدى التليف ، أولا ، قسم كتل القلب المضمنة في البارافين. ضع الأقسام على شريحة. قم بتسخين الشريحة لإذابة البارافين ، مما يسمح للأقسام بالالتصاق.

اغمس الشريحة في الإكسيلول لإزالة الأنسجة من البارافين. عالج الأقسام ذات القوة الكحولية الهابطة ، لإعادة ترطيب الأقسام ، والمساعدة في الارتباط اللاحق لمكونات البقع المائية.

احتضان الأقسام في مثبت حمضي يربط البروتينات ، مما يؤدي إلى استقرار بنية الأنسجة. اشطفه بالماء لإزالة المثبت المتبقي.

اغمر الشريحة في محلول الهيماتوكسيلين. تربط الصبغة الموجبة الحمض النووي سالب الشحنة ، وتلطخ النواة باللون الأزرق. اشطفها بالماء لإزالة البقع الزائدة.

احتضان الشريحة في حمض Fuchsin-Ponceau ، وهي صبغة أنيونية صغيرة الجزيئات تتفاعل مع البروتينات السيتوبلازمية الموجبة الشحنة والكولاجين ، مما يؤدي إلى تلطيخها باللون الأحمر. عالج بحمض الأسيتيك المخفف لإزالة البقع الزائدة.

اغمر الشريحة في محلول حمض الفوسفوموليبديك - Orange G. البرتقال G ، صبغة جزيئية صغيرة ، تلطخ كريات الدم الحمراء البرتقالي والأحمر. حمض الفوسفوموليبديك ، وهو حمض جزيئي كبير ، يطرد أصباغ الجزيئات الصغيرة من الكولاجين ، مما يجعله عديم اللون.

احتضان الأقسام في صبغة خضراء فاتحة ، تربط جزيئاتها ألياف الكولاجين ، وتلوينها باللون الأخضر. تحت المجهر ، تظهر المناطق الليفية باللون الأخضر مما يشير إلى ترسب الكولاجين المفرط.

في هذا الإجراء ، قم بإعداد أقسام أنسجة بسمك خمسة ميكرون من كتل البارافين باستخدام ميكروتوم يدوي. بعد ذلك ، قم بتلطيخ شريحة واحدة من كل قسم من أقسام القلب ، لكل فأر مع تلطيخ Masson-Goldner Trichrome. بالنسبة لأقسام البارافين ، قم بإذابة الأنسجة على حرارة 60 درجة مئوية في الفرن. تحت غطاء الدخان ، قم بإزالة البارافين في الإكسيلول مرتين ، لمدة 10 دقائق لكل منهما.

ثم أعد ترطيبها بنسبة 100٪ إيثانول ، و 95٪ إيثانول ، و 70٪ إيثانول ، ثم الماء المقطر لمدة ثلاث دقائق لكل منهما. بالنسبة للأقسام غير البارافينية ، وللأقسام المبردة ، قم بإصلاحها في محلول Bouin طوال الليل. في صباح اليوم التالي ، اشطفها بماء الصنبور الجاري لمدة 10 إلى 15 دقيقة. ثم اشطفها مرة أخرى باستخدام الماء المقطر.

التثبيت في Bouin هو أهم خطوة لضمان تلطيخ Goldner الرائع.

احتضنها في الهيماتوكسيلين من ماير لمدة ثلاث دقائق. بعد 3 دقائق ، قم بإزالة الشرائح واتركها في الماء المقطر لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، قم باحتضانها في Ponceau-acid Fuchsin لمدة خمس دقائق ، قبل شطفها بحمض الأسيتيك 1٪ لمدة دقيقة واحدة.

بعد ذلك ، احتضان الأقسام في حمض الفوسفوموليبديك Orange G لمدة دقيقة واحدة ، ثم اشطفها بحمض الأسيتيك بنسبة 1٪ لمدة دقيقة واحدة. احتضن في صبغة خضراء فاتحة لمدة 10 دقائق ، ثم اشطفها بحمض الأسيتيك 1٪ لمدة دقيقة واحدة. أخيرا ، قم بتجفيف الأقسام في 70٪ إيثانول لمدة 30 ثانية ، و 95٪ إيثانول لمدة 30 ثانية ، و 100٪ إيثانول لمدة خمس دقائق متتالية. ضع قطرة واحدة من وسط التثبيت الراتنجي على أقسام المناديل ، وقم بتغطيتها بأغطية ، وضعها حتى تجف.