JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 3:03 د • July 8th, 2025
في صدأ القهوة ، تهبط جراثيم Hemileia vastatrix - فطر ممرض - على سطح النبات وتنمو أنبوب إنبات ، وبالتالي تبدأ العدوى عبر الخيوطات.
تنتشر هذه الخيوط داخل الأنسجة وتغزو الخلايا النباتية عبر هياكل متخصصة تشبه الأصابع تسمى haustoria ، والتي تمتص العناصر الغذائية النباتية. تفرز Haustoria أيضا جزيئات مستجيب معترف بها بواسطة بروتينات مقاومة النبات ، مما يؤدي إلى تغليف الغني بالبكتين للهاوستوريا للحد من العدوى.
لتصور هذا التفاعل ، ابدأ بقسم أوراق البن المصابة فائقة النحافة والمضمنة بالراتنج. الآن ، عالج العينة بقطن اللاكتوفينول الأزرق - وهي بقعة نسيجية تتكون من الفينول وحمض اللاكتيك والجلسرين والأزرق القطني. تسخين الشريحة لفترة وجيزة.
عندما تخترق مكونات الصبغة الأنسجة ، يقضي الفينول على أي كائنات حية ، بينما يساعد حمض اللاكتيك والجلسرين في الحفاظ على البنية الخلوية. في الوقت نفسه ، ترتبط جزيئات القطن الأزرق بشقوق الكيتين في جدار الخلية الفطرية وتلطخها باللون الأزرق.
اغسل العينة بالماء المقطر. ثم عالج العينة بصبغة الروثينيوم الحمراء.
ترتبط جزيئات الروثينيوم موجبة الشحنة بالسكريات سالبة الشحنة في جدار الخلية النباتية الغنية بالبكتين وتلطخها باللون الأحمر. مرة أخرى ، اغسل الشريحة وتخيلها تحت المجهر.
يظهر جدار الخلية النباتية الغنية بالبكتين باللون الأحمر ، مما يغلف haustoria الزرقاء الممتدة من الخيوط الفطرية الزرقاء.
قم بتقطيع الكتلة إلى أقسام بسمك 5 ميكرومتر باستخدام ميكروتوم دوار مزود بشفرات فولاذية 8 سم. ضع الأقسام على شرائح زجاجية مغطاة بالماء المقطر ، ثم انقل الشرائح إلى صفيحة ساخنة لتجف عند 40 درجة مئوية ، وعزز التصاق الأقسام بالشرائح الزجاجية.
بعد التجفيف ، قم بتسمية الشرائح الزجاجية باسم مرجع الكتلة ورقم الشريحة. غطي الأقسام ب 2 مل من القطن الأزرق بنسبة 5٪ في اللاكتوفينول ، وقم بتسخينها على طبق ساخن على حرارة 45 درجة مئوية لمدة خمس دقائق.
قم بإزالة الصبغة الزائدة عن طريق غسل الشريحة ثلاث مرات في دورق مملوء بالماء المقطر. قم بتلطيخها ب 2 ملليلتر من 0.01٪ روثينيوم أحمر في الماء لمدة دقيقة واحدة.
قم بإزالة الصبغة الزائدة عن طريق غسل الشريحة ثلاث مرات في دورق مملوء بالماء المقطر. ضع قطرة من الماء المقطر فوق الأقسام ، وقم بتغطية الأقسام بغطاء لإجراء تحليل المجهر الضوئي.