JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 2:49 د • July 8th, 2025
التليف هو ترسب متزايد للكولاجين الليفي في المصفوفة خارج الخلية للأنسجة التالفة. من الناحية الهيكلية ، يتكون من سلاسل بولي ببتيد الكولاجين الحلزونية الثلاثية.
لتلطيخ الكولاجين بصبغة بيكروسيريوس الحمراء ، خذ قسما من أنسجة القلب مثبتة ببارافورمالديهايد ومضمنة في البارافين. اغمر قسم الأنسجة في الزيلين - مذيب عضوي - لإذابة الشمع المحيط.
عالج الأنسجة منزوعة البارافين بالتتابع بتركيزات منخفضة من الكحول لتحل محل الزيلين. اغمر الأنسجة في الماء لإعادة ترطيبها للحصول على تصور أفضل للبقع في الخطوات اللاحقة.
اغمس الأنسجة في محلول أحمر picrosirius يحتوي على Sirius red - صبغة آزو أنيونية - وحمض البيكريك.
يحتويSirius red على مجموعات سلفونيك حمضية تتفاعل مع المجموعات الأمينية الأساسية من اللايسين والهيدروكسيل ليسين والأرجينين الموجود في الكولاجين. يساعد حمض البيكريك في الحفاظ على درجة الحموضة الحمضية ، مما يسهل ارتباط جزيئات الصبغة في اتجاه مواز مع الكولاجين.
اشطف الشرائح في محلول محمض لإزالة البقع لإزالة البقع الزائدة. ضع قطرة من وسيط التثبيت على الشريحة واعرضها تحت مجهر المجال الساطع.
تظهر المنطقة الليفية المحتوية على الكولاجين باللون الأحمر الفاتح مقارنة بالمناطق غير الليفية ذات اللون الأصفر.
بعد تثبيت أنسجة القلب ، ضعه على جهاز تقطيع الأنسجة ، وقم بتقطيعه إلى شرائح بسمك 2 ملم ، وضع الأقسام في شريط مدمج.
بعد تضمين البارافين والتقسيم الإضافي وفقا لبروتوكول النص ، قم بإزالة الشرائح عن طريق وضعها في خزان يحتوي على الزيلين لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، أعد ترطيب الأنسجة في سلسلة كحول مخففة بالتتابع ، متبوعا بالماء المقطر.
بعد ذلك ، استخدم محلول بيكروسيريوس الأحمر المناسب لتغطية أقسام الأنسجة بالكامل ، واحتضانه لمدة ساعة واحدة. بعد ذلك ، استخدم محلول حمض الأسيتيك 0.5٪ لشطف الشرائح مرتين ، واشطف العينات مرتين بالكحول المطلق.
جفف العينات في الهواء ، وقم بتركيبها في الراتنج الصناعي مع غطاء الغطاء. بعد ذلك ، استخدم الضوء المرئي تحت المجهر بتكبير 200X لتصوير الشرائح.