موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:48 دقيقة • July 8th, 2025
يحدث تصلب الشرايين بسبب تراكم البروتينات الدهنية في البطانة الداخلية للشرايين ، مما يؤدي إلى تراكم البلاك ، وسماكة الشرايين وتضيقها ، وانخفاض تدفق الدم.
تتكون اللويحات من غطاء ليفي مع خلايا عضلية ملساء ومصفوفة خارج الخلية ، وتحيط بنواة تتكون من البروتينات الدهنية منخفضة الكثافة ، LDLs - جزيئات كروية ذات نواة كارهة للماء من استرات الكوليسترول والدهون الثلاثية ، محاطة بطبقة خارجية من الدهون الفوسفورية - جنبا إلى جنب مع الخلايا الالتهابية.
لتصور لويحات تصلب الشرايين الغنية بالدهون، احصل على قوس أورطي فأر تم حصاده حديثا. انقله إلى منصة مخصصة للخلفية الداكنة لتحسين التباين أثناء التصوير على مساحة واسعة. أضف عازلة لمنع جفاف الأنسجة.
قم بإزالة الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية الدموية المحيطة بقوس الأبهر لمنع تلطيخ الخلفية الزائفة. شق الشريان الأورطي وفروعه طوليا من خلال التجويف لكشف السطح الأعمق مع تراكم البلاك تصلب الشرايين.
قم بتأمين القوس الأبهري المفتوح على المنصة واحتضانه في الإيثانول. يزيح الإيثانول الماء من الأنسجة ، ويعطل البروتينات ، ويحافظ على بنية الأنسجة.
عالج بصبغة السودان الرابعة القابلة للذوبان في المذيبات العضوية. داخل البلاك ، تنتقل صبغة السودان الرابع ، وهي صبغة ديازو قابلة للذوبان في الدهون ذات تقارب كبير مع الدهون الثلاثية واسترات الكوليسترول في البروتينات الدهنية ، من مرحلة المذيبات العضوية وترتبط بنواة الدهون الكارهة للماء في LDLs ، وتشكل مجمعات مستقرة. اغسل البقع الزائدة باستخدام الإيثانول.
تحت المجهر المجسم ، تظهر لويحات تصلب الشرايين الغنية بالدهون الملطخة باللون البرتقالي والأحمر ، بينما تظهر المناطق غير اللويحات شاحبة.
لتحضير سرير تثبيت لتحليل الوجه ، قم بطي جزء من فيلم شمع البارافين 8 مرات لعمل سطح مسطح 25 × 25 ملم ، ولف شريط عازل كهربائي أسود حول الفيلم لعمل خلفية داكنة للشريان الأورطي.
ضع ملصقا على الجانب الخلفي من سرير التثبيت ، واستخدم قلم رصاص لتدوين رقم تعريف الماوس. انقل قوس الأبهر إلى سرير التثبيت ، وأضف قطرة من PBS إلى الأنسجة. باستخدام مجهر مجسم ، قم بتنظيف الشريان الأورطي من الأنسجة الدهنية المتبقية حول الولادة ، واستخدم مقص فاناس وملقط دومون لتقشير جميع الأنسجة الدهنية المحيطة بلطف دون التلاعب بالشريان الأورطي أو إتلافه.
بعد ذلك ، أدخل مقص Vannas في تجويف الأبهر لفضح السطح الداخلي. ابدأ في قطع الانحناء الخارجي للقوس الصاعد في الاتجاه البعيد مع الاستمرار في قطع الفروع ، بما في ذلك الشريان العضدي الرأسي ، وتجنيب الجزء الظهري من المنطقة الصدرية الهابطة.
لعرض السطح الحمي، افتح الانحناء الأصغر، وافتح الشريان الأورطي. باستخدام حامل إبرة Castroviejo صغير ، قم بتأمين القوس المفتوح على سرير التثبيت بالطرف الحاد من دبابيس الحشرات الدقيقة دون تمديد العينة ، وثني المسامير برفق بعيدا عن العينة ، حيث يتم تثبيت الأنسجة في مكانها. بعد ذلك ، قم بتخزين القوس المثبت ووجهه لأسفل في طبق بتري من PBS عند 4 درجات مئوية.
بالنسبة لتلوين السودان الرابع ، اشطف العينة لمدة 5 دقائق في طبق بتري يحتوي على 70٪ من الإيثانول بحيث يكون القوس متجها لأسفل ، قبل نقل العينة إلى طبق من محلول العمل السوداني الرابع لمدة 7 دقائق.
في نهاية الحضانة ، اشطف العينة بغسلتين لمدة 3 دقائق في 80٪ من الإيثانول لإزالة بقع السطح الحميمي الطبيعي متبوعا بشطف نهائي في PBS ، قبل إعادة الأنسجة إلى طبق بتري الأصلي. بعد ذلك ، احصل على صور مجهرية تحت مجهر مجسم متصل بكاميرا رقمية بتكبير 10X ، واحصل على صور للقوس المثبت المغمور في PBS ، باستخدام أوزان معدنية صغيرة لتثبيت سرير التثبيت في قاع طبق بتري.