JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 2:37 د • July 8th, 2025
في الخلايا النباتية ، يحيط جدار الخلية ، وهي طبقة واقية متخصصة ، بغشاء البلازما. يتكون جدار الخلية في الغالب من السليلوز ، وهو عديد السكاريد الخطي غير المتفرع من مونومرات الجلوكوز المرتبط من طرف إلى طرف عبر β-1 ، 4 روابط جليكوسيدية.
يوجد السليلوز في حالة مجمعة في شكل ألياف دقيقة من السليلوز مرتبة بشكل متعامد ، مدمجة في مصفوفة هيميسليلوز وبكتين وبروتين.
تحتوي بعض الخلايا ، مثل أنسجة نسيج الخشب الوعائي والألياف بين اللفافات ، أيضا على اللجنين ، وهو عامل تصلب ، في جدرانها الخلوية.
لتصور ترسب السليلوز في جدران الخلايا النباتية ، ابدأ بمقاطع عرضية مدمجة في الاغاروز من جذع نبات ثنائي الفلقة في العازلة. أضف محلول مائي من الأبيض الكالكوفلور ، صبغة مستوية كيميائية فلورية. احتضان للسماح للصبغة بالانتشار في الأنسجة.
بمجرد دخوله ، يتفاعل الكالكوفلور الأبيض عبر مجموعاته الوظيفية الهيدروكسيل ويشكل روابط هيدروجينية مع مجموعات الهيدروكسيل من مونومرات الجلوكوز في السليلوز. هذا يجعل الصبغة على مقربة من السليلوز ويفضل تفاعلات فان دير فالز الإضافية ، مما يؤدي إلى مركب صبغة السليلوز المستقر.
انقل الأقسام الجذعية إلى شريحة زجاجية وقم بتركيب غطاء. تحت إضاءة الأشعة فوق البنفسجية ، تتألق جزيئات الصبغة المرتبطة بالسليلوز باللون الأبيض الفاتح.
تظهرخلايا البشرة والقشرة واللب مضان مكثف ، مع مخططات محددة بوضوح لجدار الخلية ، بسبب ارتفاع محتوى السليلوز. بالمقارنة ، تتألق خلايا نسيج الخشب والألياف بين اللفافات بشكل خافت ، مما قد يشير إلى عدم كفاية انتشار الصبغة بسبب وجود اللجنين.
بالنسبة للتلطيخ الأبيض الكالكوفلوري ، انقل الأقسام الجذعية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق ، وأضف ملليلتر واحد من محلول الكالكوفلور الأبيض 0.02٪. مرر الماصة برفق لأعلى ولأسفل. تابع احتضان الأقسام وغسلها كما هو مفصل في بروتوكول النص قبل مراقبة الأقسام تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.