موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • July 8th, 2025
لفصل كروماتوغرافيا تبادل الأنيون لبروتين محل اهتمام من محللة البروتين البكتيري المحللة ، أضف عازلة ملزمة لتقليل لزوجة المحللة ومنعها من انسداد العمود الكروماتوجرافي.
تربط العوامل المخلبية الموجودة في المخزن المؤقت الكاتيونات ثنائية التكافؤ ، مما يثبط نشاط البروتياز ويمنع تدهور البروتين. بالإضافة إلى ذلك ، فإن المخزن المؤقت الذي يحتوي على درجة حموضة فوق النقطة المتساوية الكهربية للبروتين المستهدف ، pI ، وهو الرقم الهيدروجيني الذي لا يحتوي عنده البروتين على شحنة صافية ، يتسبب في تحييد أيونات الهيدروكسيل سالبة الشحنة الزائدة لمجموعات الأمين الموجبة الشحنة للبروتين ، مما يجعل سطح البروتين سالبا الشحنة.
قم بتجميع عمود كروماتوغرافيا تبادل الأنيون الذي يحتوي على مرحلة ثابتة متشابكة قائمة على الاغاروز مع مجموعات أمين رباعية موجبة الشحنة. أضف المخزن المؤقت الملزم لإعداد العمود لتحقيق أقصى قدر من تفاعل البروتين أثناء تحميل العينة. قم بتحميل المحللة البكتيرية المخففة.
ترتبط البروتينات المستهدفة سالبة الشحنة بإحكام بالمجموعات الموجبة الشحنة في العمود أكثر من البروتينات الأقل سالبة الشحنة.
قم بتشغيل المخزن المؤقت المرتبط لإزالة البروتينات المشحونة موجبة الشحنة غير المنضمة من العمود. قم بتمرير مخزن مؤقت للشطف عبر العمود ، مما يزيد تدريجيا من تركيز الملح. عند تركيزات الملح المنخفضة ، تتنافس الأيو
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية