الفصل القائم على كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لمتغيرات حمض الميكوليك: طريقة لفصل دهون جدار الخلايا الفطرية بناء على القطبية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:26 دقيقة • July 8th, 2025
جدار الخلية الفطرية على أنواع مختلفة من الأحماض الفطرية - الأحماض الدهنية طويلة السلسلة مع سلاسل ألفا المحفوظة. توجد اختلافات هيكلية في سلاسل بيتا الخاصة بهم ، مما يؤدي إلى اختلافات في قطبية الأحماض الفطرية المختلفة.
لفصل المتغيرات باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، أو TLC - تقنية كروماتوغرافيا سائلة - خذ دهون جدار الخلية الفطرية في المذيب العضوي المطلوب. بقعة الدهون بالقرب من قاعدة لوحة TLC المطلية مسبقا بطبقة رقيقة من المواد الماصة ، والتي تعمل كمرحلة ثابتة.
ضع اللوحة داخل وعاء يحتوي على مذيب عضوي - المرحلة المتحركة - مع التأكد من أن مستوى السائل أقل من بقع العينة لمنع الانتشار المبكر للأحماض
الفطرية.أثناء الجري ، ترتفع المرحلة المتحركة من خلال المسام الصغيرة للطبقة الماصة على اللوحة عن طريق العمل الشعري. في النهاية ، تذوب الأحماض الفطرية في المذيب وتنتقل لأعلى.
يتم امتصاص المزيد من متغيرات حمض الفطريات القطبية بشكل عابر بواسطة المرحلة القطبية الثابتة عبر القوى بين الجزيئات ، مما يعيق حركتها الصاعدة. تبقى الأحماض الفطرية القطبية الأقل في المرحلة المتنقلة غير القطبية وتهاجر أكثر.
تؤدي الاختلافات في الهجرة إلى انفصال متغيرات حمض المكوليك إلى نطاقات منفصلة.
عند الانتهاء ، رش الطبق المجفف ببقعة حمض الفوسفوروموليبديك. قم بتسخين اللوحة لتقليل البقعة في وجود الدهون ، مما يضف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية