تنقية الفيروس العصعصبي القائم على كروماتوغرافيا تقارب الهيبارين: تقنية لعزل الفيروس العصبي من طافي خلايا الحشرات
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:40 دقيقة • July 8th, 2025
الفيروسات العصبية - فيروسات الحمض النووي مزدوجة الشريطة - محاطة بمغلف يحتوي على بروتينات سكرية فيروسية رئيسية ، مثل GP64.
لعزل الفيروسات الباكولوجية من مادة طافية لزراعة الخلايا تحتوي على بقايا خلوية وبروتينات ملوثة ، قم بتجميع عمود كروماتوغرافيا تقارب الهيبارين يحتوي على مصفوفة من حبات الاغاروز المتشابكة. تقترن هذه الخرزات بالهيبارين ، وهو عديد السكاريد الخطي مع مجموعات الكبريتات ، والتي تضفي شحنة سالبة على سلسلة الهيبارين.
قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت للغسيل ذو درجة حموضة محايدة وقوة أيونية مثالية لتوفير ظروف مواتية لأقصى قدر من تفاعلات الفيروس الباكولوفيري والهيبارين أثناء التحميل الطافي. قم بتحميل المادة الطافية المحتوية على الفيروسات العصبية على العمود.
تسهل الأحماض الأمينية الأساسية في الفيروس الباكولوفير GP64 التفاعلات الكهروستاتيكية غير المحددة مع الهيبارين سالب الشحنة وترتبط بإحكام بالعمود ، على عكس الملوثات التي ترتبط بشكل فضفاض. اشطف العمود بمخزن مؤقت للغسيل ، وقم بإزالة البروتينات والحطام الملوثة غير المرتبطة وغير المرتبطة.
قم بتمرير مخزن مؤقت للشطف بقوة أيونية أعلى من مخزن الغسيل عبر العمود. تؤدي القوة الأيونية الأعلى إلى تعطيل التفاعلات الكهروستاتيكية بين الفيروس العصبي والهيبارين ، مما يؤدي إلى فصل الفيروسات العصبية وإزالتها من العمود.
اجمع الشفط المحتوي على فيروس با
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية