تنقية الفيروس العصعصبي القائم على كروماتوغرافيا تقارب الهيبارين: تقنية لعزل الفيروس العصبي من طافي خلايا الحشرات

0 مشاهدات3:40 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفيروسات العصبية - فيروسات الحمض النووي مزدوجة الشريطة - محاطة بمغلف يحتوي على بروتينات سكرية فيروسية رئيسية ، مثل GP64.

لعزل الفيروسات الباكولوجية من مادة طافية لزراعة الخلايا تحتوي على بقايا خلوية وبروتينات ملوثة ، قم بتجميع عمود كروماتوغرافيا تقارب الهيبارين يحتوي على مصفوفة من حبات الاغاروز المتشابكة. تقترن هذه الخرزات بالهيبارين ، وهو عديد السكاريد الخطي مع مجموعات الكبريتات ، والتي تضفي شحنة سالبة على سلسلة الهيبارين.

قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت للغسيل ذو درجة حموضة محايدة وقوة أيونية مثالية لتوفير ظروف مواتية لأقصى قدر من تفاعلات الفيروس الباكولوفيري والهيبارين أثناء التحميل الطافي. قم بتحميل المادة الطافية المحتوية على الفيروسات العصبية على العمود.

تسهل الأحماض الأمينية الأساسية في الفيروس الباكولوفير GP64 التفاعلات الكهروستاتيكية غير المحددة مع الهيبارين سالب الشحنة وترتبط بإحكام بالعمود ، على عكس الملوثات التي ترتبط بشكل فضفاض. اشطف العمود بمخزن مؤقت للغسيل ، وقم بإزالة البروتينات والحطام الملوثة غير المرتبطة وغير المرتبطة.

قم بتمرير مخزن مؤقت للشطف بقوة أيونية أعلى من مخزن الغسيل عبر العمود. تؤدي القوة الأيونية الأعلى إلى تعطيل التفاعلات الكهروستاتيكية بين الفيروس العصبي والهيبارين ، مما يؤدي إلى فصل الفيروسات العصبية وإزالتها من العمود.

اجمع الشفط المحتوي على فيروس باكوجو في التدفق. قم بتخفيف تعليق الفيروس العصبي على الفور بمخزن مؤقت يحتوي على تركيزات الملح الفسيولوجية ، مما يمنع تعطيل الفيروس. يمكن استخدام الفيروسات العصبية المعزولة لمزيد من التحليل.

قم بإعداد نظام الكروماتوغرافيا عن طريق وضع خط الغسيل العازل من منفذ المدخل A1 في زجاجة تحتوي على 500 مل على الأقل من مخزن الغسيل المؤقت. استخدم منفذ مدخل المخزن المؤقت A2 لتحميل المخزن المؤقت للشطف.

أدخل عدة أنابيب مخروطية سعة 50 مليلتر في مجمع الكسر لجمع طافي فيروس باكوجو التمرير للعمود ، ومخزن الغسيل ، والفيروس الباكولو. قم بموازنة عمود الهيبارين بخمسة أحجام أعمدة سعة 7.9 ملليلتر من المخزن المؤقت للغسيل ، بمعدل تدفق خطي يبلغ 7 ملليلتر في الدقيقة.

قم بتحميل 250 مل من المادة الطافية لفيروس الباكولو على عمود الهيبارين ، باستخدام مضخة العينة لمنفذ عينة المدخل بمعدل تدفق خطي يبلغ 2 مل في الدقيقة. بعد ذلك ، قم بتشغيل 10 أحجام أعمدة من مخزن الغسيل عبر عمود الهيبارين بمعدل تدفق خطي يبلغ 2 مل في الدقيقة ، حتى يعود منحنى امتصاص الأشعة فوق البنفسجية إلى خط الأساس ويصبح مستقرا.

قم بتخفيف جزيئات الفيروس العصبي من عمود الهيبارين بخمسة أحجام أعمدة من المخزن المؤقت للشطف بمعدل تدفق خطي يبلغ 4 ملليلتر في الدقيقة. راقب ذروة شطف حادة للبروتين على الكروماتوجرام عندما تنفصل جزيئات الفيروس العصبي عن عمود الهيبارين.

بعد الشطف، قم على الفور بتخفيف المادة الطافية للفيروس الباكولوغرافي المملوثة 10 أضعاف باستخدام مخزن فوسفات الصوديوم 20 ملليمولار لمنع تعطيل جزيئات الفيروس العصبي من الصدمة التناضحية أثناء الطرد المركزي اللاحق.

10:41

باستخدام TMEM184A GFP الموسومة نبني لتأكيد الهيبارين مستقبلات الهوية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:50

كشف وإزالة التلوث Nuclease أثناء تنقية Integrase فيروس مزبد النموذج المؤتلف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:31

تطوير عملية إنتاج وتنقية الفيروسات المرتبطة أدينو (AAV)2 ناقلات باستخدام نظام زراعة خلايا فيروس الحشرات Baculovirus

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:00

فحص SUMOylation: تقنية في المختبر للكشف عن حالة SUMOylation لبروتينات الركيزة عن طريق النشاف المناعي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:22

GST-صاحب تنقية: A خطوتين تقارب بروتوكول تنقية استسلام كامل طول البروتينات تنقية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:45

في المختبر تحليل سومويليشن لدراسة النشاط ليجاسى E3 السومو

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

06:11

إنتاج وتنقية باكولوفيروس لتطبيق العلاج الجيني

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:53

تنقية وإعادة تشكيل TRPV1 لتحليل سبيكتروسكوبيك

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:12

التعبير وتنقية قنوات أيون بيستروفين الثدييات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:14

تعديل ناقلات التعبير باكولوفيروس لإنتاج يفرز البروتينات النباتية في خلايا الحشرات

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026