كروماتوغرافيا التبادل الكاتيوني: تقنية لعزل البروتين المؤتلف المستهدف من تحلل خلايا الحشرات بناء على صافي الشحنة السطحية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:33 دقيقة • July 8th, 2025
كروماتوغرافيا التبادل الكاتولي فصل البروتين عن المخاليط بناء على صافي شحنة السطح.
لعزل بروتين محول الإشارة المستهدفة من محللة بروتين خلية الحشرات ، احصل على محللة بروتين مستهدفة مكفولة للغسيل تحتوي على بروتينات ملوثة أخرى. أضف المخزن المؤقت المحتوي على كلوريد الصوديوم لتقليل لزوجة المحللة وتحسين ذوبان البروتين ، مما يساعد على منع انسداد العمود الكروماتوغرافي أثناء التشغيل.
بالإضافة إلى ذلك ، فإن الرقم الهيدروجيني العازل أسفل النقطة المتساوية الكهربية للبروتين المستهدف ، pI ، حيث يكون للبروتين شحنة صافية صفرية ، يسهل ارتباط أيونات الهيدروجين الزائدة بمجموعات الكربوكسيل السالبة ، مما يجعل البروتين المستهدف مشحونا إيجابيا.
قم بتجميع العمود الكروماتوغرافي الذي يحتوي على حبات الاغاروز المتشابكة مقترنة بمجموعات سالبة الشحنة. أضف المخزن المؤقت الملزم لموازنة العمود وزيادة تفاعلات البروتين العمودية. قم بتحميل المحللة المخففة على العمود المتوازن.
تتفاعل البروتينات المستهدفة الأكثر شحنة إيجابية وترتبط بإحكام بالمجموعات سالبة الشحنة في العمود من البروتينات الملوثة الأقل شحنة إيجابية.
اغسل العمود بمخزن مؤقت لإزالة البروتينات الملوثة سالبة الشحنة غير المنضمة. بعد ذلك ، قم بتمرير المخزن المؤقت للشطف ، مع زيادة قوته الأيونية تدريجيا.
عند القوة الأيونية المنخفضة ، يكون هناك حد أدنى من المنافس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية