كروماتوغرافيا التبادل الكاتيوني: تقنية لعزل البروتين المؤتلف المستهدف من تحلل خلايا الحشرات بناء على صافي الشحنة السطحية

0 مشاهدات3:33 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
يسهل

كروماتوغرافيا التبادل الكاتولي فصل البروتين عن المخاليط بناء على صافي شحنة السطح.

لعزل بروتين محول الإشارة المستهدفة من محللة بروتين خلية الحشرات ، احصل على محللة بروتين مستهدفة مكفولة للغسيل تحتوي على بروتينات ملوثة أخرى. أضف المخزن المؤقت المحتوي على كلوريد الصوديوم لتقليل لزوجة المحللة وتحسين ذوبان البروتين ، مما يساعد على منع انسداد العمود الكروماتوغرافي أثناء التشغيل.

بالإضافة إلى ذلك ، فإن الرقم الهيدروجيني العازل أسفل النقطة المتساوية الكهربية للبروتين المستهدف ، pI ، حيث يكون للبروتين شحنة صافية صفرية ، يسهل ارتباط أيونات الهيدروجين الزائدة بمجموعات الكربوكسيل السالبة ، مما يجعل البروتين المستهدف مشحونا إيجابيا.

قم بتجميع العمود الكروماتوغرافي الذي يحتوي على حبات الاغاروز المتشابكة مقترنة بمجموعات سالبة الشحنة. أضف المخزن المؤقت الملزم لموازنة العمود وزيادة تفاعلات البروتين العمودية. قم بتحميل المحللة المخففة على العمود المتوازن.

تتفاعل البروتينات المستهدفة الأكثر شحنة إيجابية وترتبط بإحكام بالمجموعات سالبة الشحنة في العمود من البروتينات الملوثة الأقل شحنة إيجابية.

اغسل العمود بمخزن مؤقت لإزالة البروتينات الملوثة سالبة الشحنة غير المنضمة. بعد ذلك ، قم بتمرير المخزن المؤقت للشطف ، مع زيادة قوته الأيونية تدريجيا.

عند القوة الأيونية المنخفضة ، يكون هناك حد أدنى من المنافسة بين الأيونات الموجبة والبروتينات على المجموعات السالبة في العمود ، مما يؤدي إلى بروتينات ملوثة ضعيفة الارتباط وأقل شحنة موجبة الشحنة. ومع ذلك ، مع زيادة القوة الأيونية ، تتنافس أيونات الملح مع بروتينات محول الطاقة المستهدفة المرتبطة بإحكام وتقلل من التفاعلات بين البروتينات والعمود ، مما يؤدي إلى تغطيتها كجزء منقى.

قم بإعداد عمود تبادل كاتيوني سعة 20 مليلتر عن طريق غسله بثلاثة أحجام أعمدة من Buffer G ، ثم بثلاثة أحجام أعمدة من Buffer F. بعد ذلك ، قم بتخفيف 20 مل من العينة التي تم تحليلها إلى تركيز كلوريد الصوديوم النهائي البالغ 100 ملليمولي ، بإضافة 20 مل من Buffer E ، وقم بتطبيق العينة على عمود التبادل.

من الأهمية بمكان تخفيف الكمية الصغيرة من العينة بدلا من كلها مرة واحدة ، ويجب تطبيق العينات المخففة على العمود مباشرة بعد التخفيف للحد من ترسيب البروتين.

استمر في تحميل العمود بعينة مخففة حديثا مع اقتراب التخفيف السابق من نهاية الحمل. بعد ذلك ، اغسل العمود إلى امتصاص خط الأساس 280 باستخدام Buffer F ، والذي يتطلب عادة ثلاثة أحجام أعمدة.

قم بإزالة البروتين من العمود بتدرج 400 مليلتر من Buffer F إلى 65٪ Buffer G ، وجمع الشطف في كسور 6 ملليلتر. بمجرد اكتمال التدرج ، استمر في غسل العمود للحصول على 1.5 وحدة تخزين عمود إضافية بنسبة 65٪ Buffer G.

07:50

كشف وإزالة التلوث Nuclease أثناء تنقية Integrase فيروس مزبد النموذج المؤتلف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:41

التبادل الأيوني اللوني (المستوى) بالإضافة إلى تشتت الضوء زاوية المتعددة (مالس) لفصل البروتين وتوصيف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:14

البصمات اللونية حسب مطابقة القالب للبيانات التي تم جمعها بواسطة كروماتوغرافيا غاز ثنائية الأبعاد شاملة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:21

آلية التفاعل اللوني مسعور اختيار عمود للاستخدام في تنقية البروتين

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:28

التنقية الانتقائية للبروتين البكتيري عن طريق كروماتوغرافيا التبادل الأيوني السالب

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:54

تقنية كروماتوغرافيا الألفة لتنقية بروتين بكتيري مؤتلف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:59

تنقية البروتين القائم على كروماتوغرافيا تبادل الأنيونات: تقنية فصل لعزل بروتين ذي أهمية من محللة البكتيريا المحللة بالكلى بناء على صافي الشحنة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:54

تنقية البروتين القائم على كروماتوغرافيا النيكل: تقنية لتنقية البروتينات المؤتلفة الموسومة بالبولي هيستيدين من محللة الخلايا البكتيرية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:37

البروتين مجمع القبض على الانجذاب من خلايا الثدييات Cryomilled

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:07

تقييم تفاعلات البروتين والبروتين باستخدام تقنية الهضم على الغشاء

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026