الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل الماء: تقنية لفصل التحليلات القطبية المحبة للماء باستخدام الخرز المحبة للماء
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:07 دقيقة • July 8th, 2025
الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحبة للماء ، HILIC ، هي تقنية لفصل المركبات القطبية المحبة للماء بناء على درجة قطبيتها ابدأ بإعداد عمود HILIC مليء بالخرز المحبة للماء الذي يحمل مجموعات وظيفية قطبية.
أولا ، قم بتكييف العمود باستخدام عازلة توازن ومرحلة متحركة - خليط من المذيبات العضوية والماء. تعمل جزيئات المخزن المؤقت على تثبيت الأس الهيدروجيني ، بينما يشبع المذيب العضوي العمود. تجميد جزيئات الماء وتخلق طبقة مائية فوق الخرز المحبة للماء.
قم بتحميل العينة التي تحتوي على خليط من الجليكان - المركبات القطبية المحبة للماء - المسمى بعلامة الفلورسنت. قم بتشغيل العينة باستخدام تدرج طور متحرك عبر العمود بمعدل تدفق مثالي.
عندما تتحرك العينة على طول المرحلة المتنقلة الكارهة للماء ، تهاجر الجليكان إلى الطبقة المائية ، تاركة وراءها الشوائب. بعد ذلك ، تتحرك الجليكان نحو المجموعات الوظيفية القطبية على الخرز. هنا ، ترتبط المزيد من الجليكانات القطبية بقوة ، بينما ترتبط الجليكانات الأقل قطبية بشكل فضفاض.
مع انخفاض الكراهية للماء في المرحلة المتنقلة ، تتخلص الجليكانات ضعيفة الارتباط مع قطبية أقل ووقت احتفاظ أقصر أولا. على العكس من ذلك ، فإن الجليكان المرتبط بقوة مع قطبية أعلى ووقت احتفاظ أطول أخيرا.
أخيرا ، يكتشف الكاشف إشارة الفلورسنت للكسور المملوءة ، المقابلة لقمم الجليكان القياسية في الكروماتوجر
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية