فصل الكروماتوغرافيا القائم على استبعاد الحجم للحويصلات البكتيرية خارج الخلية: تقنية لفصل السكان غير المتجانسين لحويصلات الغشاء الخارجي البكتيرية سالبة الجرام بناء على حجمها

في ظل ظروف الاستزراع المناسبة ، تطلق البكتيريا سالبة الجرام حويصلات غشائية خارجية حاملة للبضائع ، أو OMVs ، في المادة الطافية. هذه الحويصلات هي هياكل كروية صغيرة الحجم غير متجانسة ، والتي تتوسط الاتصال الخلوي.

لتجزئة مجموعات سكانية فرعية مختلفة الحجم من OMVs ، خذ عمودا فارغا للكروماتوغرافيا لاستبعاد الحجم مع مرشح مناسب في قاعدته لدعم المصفوفة.

قم بتعبئة العمود بمصفوفة ترشيح هلامية تتكون من حبات كروية خاملة كيميائيا ذات حجم مسام محدد ، مما يضمن أن الحجم مثالي لاستبعاد OMVs كبيرة الحجم من الدخول. قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت مناسب لمنع الخرزات من الجفاف للحصول على تنقية مثالية.

قم بتحميل المادة الطافية للثقافة البكتيرية التي تحتوي على مجموعات سكانية فرعية مختلفة الحجم من OMVs ومجاميع البروتين والأحماض النووية في الجزء العلوي من العمود. اسمح للعينات بالعمل بقوة الجاذبية.

عندما تمر العينات عبر العمود ، تتحرك OMVs الأكبر حجما التي لا يمكنها دخول المسام عبر الفراغات بين الجسيمات بين حبات الهلام ليتم فشها أولا. وفي الوقت نفسه ، تخترق OMVs الأصغر مسام المصفوفة ، وتتخذ مسارا أطول ، وتتخلص لاحقا.

نظرا لصغر حجمها ، تدخل مجاميع البروتين والأحماض النووية إلى مسام مختلفة في المصفوفة ، مما يجعلها تتمتع بأطول وقت للاحتفاظ في العمود وتشطب مثل الكسور الأخيرة. اجمع مشطات OMV المنفصلة وقم بتخزينها لمز