فصل الكروماتوغرافيا القائم على استبعاد الحجم للحويصلات البكتيرية خارج الخلية: تقنية لفصل السكان غير المتجانسين لحويصلات الغشاء الخارجي البكتيرية سالبة الجرام بناء على حجمها

0 مشاهدات4:51 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في ظل ظروف الاستزراع المناسبة ، تطلق البكتيريا سالبة الجرام حويصلات غشائية خارجية حاملة للبضائع ، أو OMVs ، في المادة الطافية. هذه الحويصلات هي هياكل كروية صغيرة الحجم غير متجانسة ، والتي تتوسط الاتصال الخلوي.

لتجزئة مجموعات سكانية فرعية مختلفة الحجم من OMVs ، خذ عمودا فارغا للكروماتوغرافيا لاستبعاد الحجم مع مرشح مناسب في قاعدته لدعم المصفوفة.

قم بتعبئة العمود بمصفوفة ترشيح هلامية تتكون من حبات كروية خاملة كيميائيا ذات حجم مسام محدد ، مما يضمن أن الحجم مثالي لاستبعاد OMVs كبيرة الحجم من الدخول. قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت مناسب لمنع الخرزات من الجفاف للحصول على تنقية مثالية.

قم بتحميل المادة الطافية للثقافة البكتيرية التي تحتوي على مجموعات سكانية فرعية مختلفة الحجم من OMVs ومجاميع البروتين والأحماض النووية في الجزء العلوي من العمود. اسمح للعينات بالعمل بقوة الجاذبية.

عندما تمر العينات عبر العمود ، تتحرك OMVs الأكبر حجما التي لا يمكنها دخول المسام عبر الفراغات بين الجسيمات بين حبات الهلام ليتم فشها أولا. وفي الوقت نفسه ، تخترق OMVs الأصغر مسام المصفوفة ، وتتخذ مسارا أطول ، وتتخلص لاحقا.

نظرا لصغر حجمها ، تدخل مجاميع البروتين والأحماض النووية إلى مسام مختلفة في المصفوفة ، مما يجعلها تتمتع بأطول وقت للاحتفاظ في العمود وتشطب مثل الكسور الأخيرة. اجمع مشطات OMV المنفصلة وقم بتخزينها لمزيد من التحليل.

للبدء ، استخدم قضيبا زجاجيا لخلط زجاجة مخزون من وسط ترشيح الجل ، واسكب الحجم المطلوب لملء العمود بالإضافة إلى ما يقرب من 50٪ من الفائض ، في زجاجة زجاجية. اترك الخرزات تستقر ، وصب السائل الزائد. أعد تعليق الخرزات في المخزن المؤقت للشطف إلى محلول نهائي من حوالي 70٪ هلام و 30٪ عازلة ، وقم بإزالة الغاز من المحلول تحت الفراغ.

قم بتركيب العمود على حامل دائري في الوضع الرأسي ، واملأ العمود بمخزن مؤقت للشطف لترطيب الجدران ، قبل تصريف المخزن المؤقت حتى يتبقى حوالي 1 سم فقط. بعد ذلك ، قم بتقطيع حبات الجل بعناية في العمود ، مع تصريف المخزن المؤقت الزائد في نفس الوقت لمنع الخرزات من الاستقرار ، حتى يتم تعبئة العمود على ارتفاع حوالي 2 سم تحت قاع خزان العمود.

قبل تحميل العينة ، قم بإزالة المخزن المؤقت للشطف تحت الفراغ. اغسل العمود بحوالي ضعف حجم عمود المخزن المؤقت للشطف. بمجرد أن يصل المخزن المؤقت إلى أعلى طبقة الهلام ، أضف بعناية 2 مل من عينة حويصلة الغشاء الخارجي من 100 إلى 200 نانومول لكل لتر أعلى طبقة الجل دون إزعاج السطح ، واترك العينة تدخل الجل.

ببطء ، أضف المخزن المؤقت للشطف إلى العمود دون إزعاج طبقة الهلام ، وضع أنبوبا سعة 50 مليلتر أسفل العمود. لمنع العمود من الجفاف ، أضف في نفس الوقت المخزن المؤقت للشطف إلى أعلى العمود.

بعد جمع 20 مل من الشطف ، ضع رفا من أنابيب سعة 1.5 مليلتر أسفل العمود. اجمع ما مجموعه 96 جزءا من 1 مليلتر في كل أنبوب. أثناء جمع العينات، أضف المخزن المؤقت للشطف باستمرار إلى العمود. لتنظيف العمود ، قم بتشغيل حجم عمود واحد من 0.1 مولي هيدروكسيد الصوديوم عبر العمود ، متبوعا بمجلدين من عمود المخزن المؤقت للشطف.

10:55

بناء وحدات صفائح هيدروجيل لتحجيم الكلي Micropatterned 3D الخلوية العمارة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:30

الوسيطة اللحمية خلية الثقافة و التوصيل في حالة ذاتي: مقاربة ذكية لتطبيقات العظام

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

05:05

إعداد الأنسجة القلبية المهندسة على شكل شبكة مشتقة من خلايا iPS البشرية لإصلاح عضلة القلب في فيفو

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

03:24

عزل الحويصلات البكتيرية خارج الخلية باستخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

04:38

تقنية كروماتوغرافيا استبعاد الحجم لتنقية الحويصلات الفطرية خارج الخلية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:26

حجم استبعاد الكروماتوغرافيا لتحليل الغشاء الخارجي البكتيري فيسيكلي التجانس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:56

عزل وتنقية الحويصلات خارج الخلية من الإشريكية القولونية والبكتيريا الأخرى قابلة للتطوير

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:44

عزل وتوصيف الحويصلات خارج الخلية البكتيرية الزرقاء

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

10:46

كروماتوغرافيا استبعاد الحجم لفصل الحويصلات خارج الخلية عن وسائط زراعة الخلايا المشروطة

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:29

المتفطرة السلية إثراء الحويصلات خارج الخلية من خلال كروماتوغرافيا استبعاد الحجم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 1 أغسطس 2026