الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل الكارهة للماء المعتمدة على البوتيل: تقنية لتوصيف اقترانات الأجسام المضادة والأدوية بناء على التفاعلات الكارهة للماء

تتشكل متقارنات الأجسام المضادة للأدوية - ADCs - عن طريق ربط جسم مضاد أحادي النسيلة محدد بالعقاقير السامة للخلايا عبر روابط مناسبة. تخلق عملية الاقتران العشوائي ADCs بأعداد مختلفة من شقوق المخدرات.

تتميز أنواع ADC بنسبة الدواء إلى الأجسام المضادة أو DAR ، والتي تحدد فعاليتها العلاجية. الكراهية للماء من ADCs يجعلها مرشحة مناسبة للتفاعل الكارهة للماء الكروماتوغرافيا السائلة أو التوصيف القائم على التحالف الدولي للموئل.

للبدء ، قم بتجميع عمود كروماتوغرافيا يحتوي على مرحلة ثابتة قائمة على مصفوفة الاغاروز. ترتبط المصفوفة بشقوق البوتيل - المجموعات الوظيفية الألكيل الكارهة للماء. موازنة العمود بمخزن مؤقت عالي لربط الملح. اتبعه عن طريق تحميل حل ADC على العمود.

تعمل

أيونات الملح الموجودة في المخزن المؤقت على إزاحة جزيئات الماء حول ADCs ، مما يعرض مناطقها الكارهة للماء. يتيح ذلك ل ADCs الارتباط بروابط البوتيل عبر التفاعلات الكارهة للماء. تظهر ADCs التي تحتوي على عدد أكبر من شقوق الأدوية المرتبطة تفاعلا أقوى مع العمود.

استبدل المخزن المؤقت عالي الملح ببطء بمحلول الشطف الذي يحتوي على تركيز منخفض من الملح. تسمى عملية التقليل التدريجي لتركيز الملح بشطف التدرج.

يؤدي الانخفاض في أيونات الملح إلى إعادة تمكين جزيئات الماء من إحاطة ADCs ، مما يعطل تفاعلها مع الروابط. يتم استخلاص ADCs التي تحتوي على أقل عدد من شقوق الأدوية المرتبطة أولا ، تليها الأنواع ذات DAR الأعلى.

مراقبة الشطف لتوصيف ADCs وفقا ل DAR الخاصة بهم.

لتحليل المترافق ، قم بموازنة عمود HPLC-HIC مع 100٪ عازلة عالية الملح لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، امزج 15 ميكرولترا من محلول 1 مجم / مل من trastuzumab المرتبط ب MMAE ، مع 15 ميكرولترا من 2X عازلة عالية الملح في قارورة. حقن الخليط على عمود HPLC. قم بتدفق متساوي 1 مل / دقيقة مع مخزن مؤقت عالي الملح بنسبة 100٪ لمدة دقيقة واحدة.

اتبع ذلك بتدرج لمدة 15 دقيقة من 100٪ إلى 0٪ من المخزن المؤقت عالي الملح في المخزن المؤقت منخفض الملح. راقب الشطف عند 280 نانومتر. قم بدمج القمم الموجودة على الكروماتوجرام مع أوقات الاحتفاظ البالغة 7.5 و 9.2 و 11.5 دقيقة ، والتي تتوافق مع trastuzumab مع صفر وواحد واثنين من السموم المترافقة على التوالي.

الآن ، احسب DAR بجمع مساحات القمم عند 9.2 دقيقة ، والتي يبلغ وزنها 1 ، و 10.5 دقيقة ، والتي يبلغ وزنها 2 ، واقسمها على المساحة الكلية للقمم الثلاث.