الكروماتوغرافيا لاستبعاد حجم الكشف عن التألق: تقنية لتحديد سلامة بروتينات الغشاء الفلوري عند إذابة المنظفات

تسهل بروتينات الغشاء المتكاملة البكتيرية ، المثبتة على أغشية ثنائية الطبقة الدهنية ، نقل الجزيئات عبر الأغشية ونقل الإشارات. بالنسبة للدراسات الهيكلية ، يتم التعبير عن البروتينات المؤتلفة الغشائية المتكاملة المحددة ببروتين الفلورسنت الأخضر المنصهر ، GFP.

لتقييم استقرار بروتين الغشاء المؤتلف بعد إذابة المنظفات ، احصل على جزء غشاء بكتيري يحتوي على بروتينات غشاء متكاملة تحمل علامة GFP. أضف منظفا غير أيوني. بالإضافة إلى التركيز الحرج ، يشكل المنظف مذيلات.

تتفاعل Micelles مع الأغشية الدهنية وبروتينات الغشاء ، مما يؤدي إلى إذابة الأغشية وتشكيل مجمعات البروتين والمنظفات. بالإضافة إلى ذلك ، قد تظل مناطق الغشاء الكارهة للماء لبروتينات الغشاء مكشوفة ، مما يتسبب في تراكم البروتين. علاوة على ذلك ، قد ينتج عن GFPs الحرة بسبب تدهور بروتينات الغشاء.

الطرد المركزي الخليط. اجمع المادة الطافية المحتوية على الأجزاء القابلة للذوبان بالمنظفات.

قم بتجميع عمود كروماتوغرافيا استبعاد الحجم المتصل بكاشف الفلورة. تتكون مصفوفة العمود من حبات الاغاروز بأحجام مسام تحدد نطاق تجزئة واسع.

قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت يحتوي على منظف لتقليل التفاعلات غير المحددة والحفاظ على إذابة البروتين.

قم بتحميل جزء الغشاء المذاب في العمود. تتهرب مجاميع البروتين من أكبر المسام وتتحرك عبر الفراغات بين الجسيمات بين الخرز ، وتتخلص