كروماتوغرافيا غاز Headspace: تقنية لتقييم تركيز الإيثانول في أجنة أسماك الزرد

لتحليل تركيز الإيثانول - وهو مركب عضوي متطاير ، ابدأ بأخذ طافي ثقافة جنين أسماك الزرد المتجانسة المعالجة بالإيثانول في قارورة كروماتوغرافيا. يحتوي المادة الطافية على مركبات عضوية أخرى غير متطايرة بالإضافة إلى الإيثانول. ضع القارورة المختومة في وحدة أخذ العينات لمجموعة الكروماتوغرافيا وقم بتسخينها في درجة حرارة مناسبة.

أثناء التسخين ، يتبخر الإيثانول وينتقل إلى مرحلة الغاز أو فراغ الرأس ، تاركا وراءه المخلفات غير المتطايرة. يسمح هذا لجهاز أخذ العينات بإدخال الإيثانول الغازي في تيار مستمر من الغاز الناقل. هذا بمثابة مرحلة متنقلة.

يمر الإيثانول عبر عمود الكروماتوغرافيا الملفوف المسخن مسبقا ، والذي يحتوي على طبقة معبأة من المرحلة الثابتة السائلة. نظرا لتقلبها وقطبيتها ، تبدأ جزيئات الإيثانول المتحركة في امتصاص جزيئات الطور الثابتة ، وتقسم نفسها إلى المرحلة الثابتة.

نظرا لارتفاع درجة حرارة العمود ، يكون امتصاص جزيئات الإيثانول غير مستقر ومؤقت ، مما يسمح لهذه الجزيئات بالامتصاص والهجرة تدريجيا على طول تدفق الغاز الناقل. تخضع جزيئات الإيثانول هذه لسلسلة من أحداث الامتزاز والامتصاص طوال طول العمود.

بعد ذلك ، يدخل الإيثانول غرفة الكشف التي تساعد في تحديد تركيزه في العينة المقابلة للمنطقة الموجودة أسفل المنحنى في الكروماتوجرام الناتج.

استخدم ماصتين من p200 مضبوطة على 50 ميكرولتر ، واستنشق محلول كوكتيل البروتياز في واحد ، والماء في الثانية. بعد ذلك ، ضع بسرعة 10 أجنة في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر باستخدام ماصة زجاجية وأغلق الغطاء. كرر هذه العملية لجميع العينات المراد اختبارها والضوابط والأجنة المعالجة بالإيثانول.

العمل مع عينة واحدة في كل مرة، وافتح الغطاء بسرعة، واستنشق جميع وسائط الأجنة المتبقية باستخدام ماصة دقيقة p200 مضبوطة على 200 ميكرولتر. قم بإضافة 50 ميكرولترا من الماء بسرعة ولكن برفق ، ثم أضف 50 ميكرولترا من كوكتيل البروتياز ، وأغلق غطاء الأنبوب.

دع العينة تجلس لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، ثم أضف بسرعة 450 ميكرولتر من 5 كلوريد صوديوم مولار ، وأغلق غطاء الأنبوب. قم بتجانس العينة عن طريق الدوامة لمدة 10 دقائق ، وانقل 2 ميكرولتر من المادة الطافية إلى قارورة كروماتوغرافيا غازية. أغلق القارورة بغطاء بولي تترافلورو إيثيلين.

بعد الانتهاء من طريقة بدء التشغيل ، قم بتحميل 436 الإيثانول الحالي spme 2013 لمدة 3 دقائق امتصاص 2_5min تشغيل rg. ميث من قائمة الطرق في برنامج التحليل لكل عينة في قائمة العينات. املأ قائمة العينات ، بدءا من الهواء والماء و 5 فراغات كوكتيل بروتياز كلوريد الصوديوم المولارية. ثم أدخل معايير الإيثانول بالترتيب من 0.3125 إلى 40 ملليمول.

اتبع المعايير مع الجولة الثانية من الفراغات. أدخل جميع عينات الطاف الزائدة للأجنة المتجانسة ليتم اختبارها ، من أدنى تركيز إلى أعلى تركيز متوقع للإيثانول ، وانتهي بإدخال جولة ثالثة من الفراغات.

أضف قوارير كروماتوغرافيا الغاز إلى جهاز أخذ العينات الأوتوماتيكي بالترتيب الذي تم إدخال العينات به ، واتركها تسخن لمدة 10 إلى 15 دقيقة. ثم ابدأ تشغيل العينة باستخدام البرنامج. بعد اكتمال جميع عمليات التشغيل، قم بتنشيط أسلوب إيقاف التشغيل عن طريق إضافة عينة نهائية في قائمة العينات وتشغيل وضع الاستعداد. ميث. قم بعمل نسخة احتياطية من جميع البيانات التي تم الحصول عليها أثناء تشغيل العينة.

بمجرد اكتمال طريقة إيقاف التشغيل ، انقر فوق فتح Chromatogram وافتح المجلد الذي يحتوي على النتائج. يتم دمج العينات تلقائيا في هذا البرنامج. في النتائج ، تأكد من دمج القمم الصحيحة. بمجرد تأكيد جميع العينات، اطبع النتائج أو قم بتصديرها.

ارسم ذروة ارتفاع معايير الإيثانول على رسم بياني. بعد ذلك ، احسب قيم الميل ، وتقاطع Y ، و R-squared. احصل على قيمة الإيثانول لكل عينة عن طريق طرح ارتفاع الذروة للعينة من تقاطع Y للمعايير ، وقسمة هذه القيمة على ميل المعايير.

لحساب تركيز الإيثانول في الأجنة ، احسب عامل التخفيف لكل عينة ، واضرب عينة قيمة الإيثانول في عامل التخفيف هذا. أخيرا ، احسب العينات المرجعية للوسائط بضرب قيمة الإيثانول الإعلامي في عامل تخفيف 10.