الرحلان الكهربائي لجل بولي أكريلاميد دوديسيل كبريتات الصوديوم لتحليل البروتين: تقنية لفصل البروتينات وتصورها بناء على الوزن الجزيئي

ابدأ بمعالجة عينة البروتين بمخزن مؤقت لتغيير الطبيعة يتكون من منظف - كبريتات دوديسيل الصوديوم ، SDS ، وعامل اختزال - بيتا ميركابتو إيثانول. سخنيها لفترة وجيزة. خلال هذه الخطوة ، يعطل بيتا ميركابتو إيثانول روابط ثاني كبريتيد ، مما يجعل التشكل غير مكشوف للبروتين.

ترتبط البروتينات المكشوفة مع الأحماض الأمينية الكارهة للماء المكشوفة ب SDS سالب الشحنة وتكتسب شحنة سالبة موحدة. أضف صبغة تتبع مناسبة إلى العينة للتصور في الوقت الفعلي.

الآن ، قم بتحميل العينة وعلامة الحجم الجزيئي القياسية في آبار منفصلة موجودة في هلام التكديس - الطبقة العليا من هلام بولي أكريلاميد التي تحتوي على تركيز أقل من بوليمرات الأكريلاميد المتشابكة.

قم بتوصيل جهاز الجل المملوء بالعازلة بمصدر الطاقة.

في وجود مجال كهربائي ، تهاجر البروتينات سالبة الشحنة بحرية نحو الأنود وتتراكم معا لدخول هلام الحل - الطبقة السفلية التي تحتوي على هلام عالي التركيز.

في هلام الحل ، تبدأ البروتينات في الهجرة وفقا لحجمها الجزيئي ، مع هجرة البروتينات الأصغر بسرعة ، مما يؤدي إلى عصابات بروتينية محلولة على النحو الأمثل. بعد ذلك ، أوقف الجري وقم بإزالة الجل.

قم

بتلطيخ الجل بصبغة أنيونية ، Coomassie blue ، التي ترتبط إلكتروستاتيكيا بالأحماض الأمينية الأساسية في البروتينات ، مما يضفي عليها اللون الأزرق. بعد ذلك ، قم بإزالة الجل في محلول حمض الأسيت