الرحلان الكهربائي لجل بولي أكريلاميد الأصلي الأزرق: تقنية فصل غير متغيرة للطبيعة لتحليل مجمعات سلسلة الجهاز التنفسي للميتوكوندريا السليمة

لتحليل مجمعات الميتوكوندريا الخمسة لسلسلة الجهاز التنفسي بوحدات فرعية سليمة ، احصل على مجمعات الميتوكوندريا القابلة للذوبان في منظف خفيف غير أيوني. تخلط مع المخزن المؤقت الذي يحتوي على Coomassie Blue-G ، وهي صبغة أنيونية.

يستبدل Coomassie المنظف ويرتبط بشكل غير محدد بالمجمعات ، مما يضفي شحنة سالبة ويلطخها باللون الأزرق. بالإضافة إلى ذلك ، يمنع Coomassie المجمعات من التراكم ويساعد في الحفاظ على هيكلها الأصلي ووظيفتها.

في خزان الرحلان الكهربائي ، قم بتجميع كاسيت جل يشتمل على جل لحل التدرج مع تناقص حجم المسام على طول الطول ، مغطى بهلام تكديس كبير بحجم المسام. املأ غرف الأنود والكاثود بأنود مبرد ومخزن كاثود يحتوي على كوماسي.

قم بتحميل الآبار بخليط مركب البروتين المرتبط ب Coomassie. بدء الرحلان الكهربائي.

تهاجر مجمعات البروتين سالبة الشحنة من هلام التكديس إلى هلام حل التدرج ، باتجاه الأنود موجب الشحنة. بينما تعبر المجمعات الأصغر بسرعة عبر المسام ، يتم إبطاء المجمعات الأكبر حجما بسبب أحجام المسام المقيدة أثناء تحركها لأسفل الجل المحلل.

يتم استبدال Coomassie المنفصلة عن المجمعات أثناء الجري ب Coomassie في مخزن الكاثود ، مما يمنع المجمعات من التحول من مواقعها الخاصة في الجل. بعد الرحلان الكهربائي ، تصور الجل. تظهر مجمعات الميتوكوندريا على شكل أشرطة زرقاء يتم حلها وفقا للحجم.

يحتل

المركب ال