الرحلان الكهربائي للهلام القلوي أحادي الخلية: تقنية حساسة للتقدير الكمي لتلف الحمض النووي في الخلايا السرطانية الفردية بعد العلاج الكيميائي

تؤدي عوامل العلاج الكيميائي إلى كسر الحمض النووي أحادي ومزدوج الخيط في الخلايا السرطانية ، مما يتسبب في تلف الحمض النووي وموت الخلايا.

لتحديد تلف الحمض النووي ، امزج الخلايا السرطانية المعالجة بالعلاج الكيميائي مع الاغاروز المنصهر منخفض الذوبان. ضع هذا الخليط على شرائح زجاجية مطلية مسبقا بالأغاروز. اسمح للأغروز المنصهر بالتصلب ، ودمج الخلايا داخل مصفوفة الهلام المسامية.

عالج بمحلول تحلل يحتوي على تركيزات عالية من المنظفات والأملاح. تعمل المنظفات على إذابة الأغشية الخلوية والنووية. علاوة على ذلك ، يزيل الملح العالي بروتينات الهيستون من الحمض النووي ، تاركا الحمض النووي فائق الالتفاف متصلا بالمصفوفة النووية.

احتضان في المخزن المؤقت للرحلان الكهربائي القلوي. تتسبب البيئة القلوية في استرخاء لفائف الحمض النووي الفائقة ، مما يؤدي إلى تعريض فواصل الحمض النووي أحادية الخيط ومزدوجة الخيط.

ضع الشرائح في صينية جل تحتوي على الرحلان الكهربائي. بدء الرحلان الكهربائي.

نظرا لكونه سالبا الشحنة ، ينجذب الحمض النووي نحو الأنود الموجب. تهاجر شظايا الحمض النووي التالفة من النواة وتنتقل عبر مصفوفة الهلام المسامية ، مع شظايا أطول طول تتحرك بشكل أبطأ من الأجزاء الأقصر. على العكس من ذلك ، لا يهاجر الحمض النووي غير التالف بسهولة ، ويبقى داخل النواة.

بعد الرحلان الكهربائي ، تلطيخ الخلايا بمحلول صبغة الحمض ال