JoVE Encyclopedia of Experiments
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدات • 4:21 د • July 8th, 2025
الرحلان الكهربائي للموائع الدقيقة هو تقنية لفصل شظايا الحمض النووي ذات الأحجام المختلفة داخل الشعيرات الدموية الدقيقة.
للبدء ، خذ شريحة موائع دقيقة متعددة الآبار تحتوي على آبار مخصصة لخليط البوليمر القائم على الهلام والصبغة الفلورية ، وعينات الحمض النووي ، وسلم الحمض النووي المعروف بالوزن الجزيئي. ترتبط هذه الآبار عبر شبكة من القنوات الدقيقة.
قم بتوزيع مزيج صبغة الهلام في الآبار المخصصة. قم بتجميع الشريحة على محطة تحضير مجهزة مسبقا بحقنة فارغة. اضغط لأسفل على مكبس الحقنة ، واضغط لإجبار مزيج صبغة الهلام على القناة الدقيقة للفصل.
قم بإزالة الرقاقة والماصة في المكونات الأخرى في الآبار الخاصة بها. أضف علامة - معيار داخلي يعاير حجم العينة - إلى الآبار التي تحتوي على السلم والعينات.
أدخل الرقاقة الدقيقة في محلل الأجزاء لتشغيل الشريحة. بمجرد دخوله ، يولد الجهد المطبق قوى كهربائية ، مما يؤدي إلى دفع العينة من البئر إلى القناة الدقيقة لتحميل العينة من حيث تصل إلى التقاطع العرضي بين هذه القناة وقناة الفصل. يساعد التيار الكهربائي العينة على دخول القناة الدقيقة للفصل.
تقومجزيئات الصبغة الفلورية بإقحام شظايا الحمض النووي سالبة الشحنة التي تتحرك نحو الأنود بسرعات كهربائية مختلفة بالنسبة لحجمها الجزيئي - الأجزاء الأصغر تهاجر بشكل أسرع من الأجزاء الأكبر. وبالتالي ، تنفصل الشظايا إلى أشرطة مختلفة الأحجام تتألق.
يقيس الكاشف القائم على الليزر تألق كل نطاق ويسجله على أنه مخطط كهربية يعرض الحمض النووي بأحجام مختلفة كذروة مميزة.
قبل البدء ، أحضر تركيز صبغة الحمض النووي ، ومصفوفة هلام الحمض النووي ، وعلامة الحمض النووي ، وسلم الحمض النووي ، وعينات الحمض النووي المنقاة إلى درجة حرارة الغرفة. قم بإعداد محطة التحضير عن طريق استبدال المحقنة وضبط لوحة القاعدة. ثم حرر ذراع مشبك المحقنة وحركها إلى الموضع العلوي.
ابدأ برنامج التحجيم وقم بإعداد مزيج صبغة الجل. قم بتدوير تركيز الصبغة لمدة 10 ثوان ، ثم قم بتدويرها. ثم أضف 25 ميكرولترا من الصبغة إلى قارورة مصفوفة هلامية ، وقم بتدوير المحلول للخلط.
انقل مزيج صبغة الجل إلى مرشح الدوران. ضعه في جهاز الطرد المركزي ، وقم بتدويره لمدة 10 دقائق عند 1,500 مرة جرام. عندما تكون جاهزا لتحميل مزيج صبغة الهلام ، أدخل شريحة DNA جديدة في محطة التحضير ، وأضف 9 ميكرولترات من مزيج صبغة الجل في البئر المميز بحرف "G".
أغلق محطة التحضير ، وتأكد من وضع المكبس عند علامة 1 ملليلتر. اضغط على مكبس المحقنة لأسفل حتى يتم تثبيته بواسطة المشبك. انتظر لمدة 30 ثانية بالضبط، ثم حرر المقطع. انتظر لمدة 5 ثوان أخرى ، ثم اسحب المكبس ببطء إلى وضع 1 ملليلتر.
افتح محطة التحضير ، وأضف 9 ميكرولتر من مزيج صبغة الهلام في الآبار المميزة بعلامة "G". أضف 5 ميكرولترات من العلامة إلى البئر المميز برمز السلم ، وكل من بئر العينة ال 12.
أضف 1 ميكرولتر من السلم إلى البئر برمز السلم ، و 1 ميكرولتر من منتج PCR أو الماء إلى آبار العينة. دوامة الرقاقة لمدة 1 دقيقة إلى 2,400 دورة في الدقيقة. أدخله في المحلل الحيوي ، وقم بتشغيل الشريحة في غضون خمس دقائق.