موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:11 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بتركيز متساوي الكهرباء تم تجميعه مسبقا ، خلية IEF - وحدة الرحلان الكهربائي في الطور السائل. هذا العمود عبارة عن غرفة مسامية أفقية مجزأة مع أطراف موجبة وسالبة مميزة في النهايات.
الآن ، خذ المستخلص النباتي الذي يحتوي على خليط معقد من المكونات المشحونة بشكل مختلف مع نقاط متساوية كهربية متفاوتة ، pI - درجة الحموضة حيث تكون الشحنة الصافية على الجزيء صفرا.
يتم استكمال المستخلص بأمفوليتات من الشحنات المتغيرة التي تسهل تجزئة مكونات العينة لاحقا.
قم بتحميل العينة في منافذ التحميل الخاصة بالعمود. حاليا ، يحتوي عمود IEF على درجة حموضة ثابتة. بعد ذلك ، قم بتطبيق الجهد العالي لبدء الرحلان الكهربائي.
تحت المجال الكهربائي ، تهاجر البرمائيات القابلة للذوبان نحو الأقطاب الكهربائية المشحونة بشكل معاكس وإنشاء تدرج الأس الهيدروجيني الخطي عبر العمود. تبدأ مكونات العينة في الهجرة عبر تدرج الأس الهيدروجيني للطور السائل ، وتلك الموضوعة عند درجة الحموضة أقل من pI تحمل شحنة موجبة صافية.
تهاجر هذه نحو القطب السالب حتى تصل المكونات إلى نقطة البكسل ، حيث تحييد شحنتها ، وتتوقف الهجرة. وبالمثل ، تهاجر المكونات عند درجة الحموضة فوق pI نحو القطب الموجب وتتوقف عندما تصل إلى pI. يؤدي هذا إلى فصل مكونات العينة بناء على pI إلى مقصورات مركزة. حصاد الكسور المنقاة لمزيد من التحليل.
أضف 0.6 جرام من مستخلص نبات Gymnema sylvestre إلى 60 مل من الماء المقطر. قم بإذابة مستخلص النبات عن طريق الخلط في أنبوب أسطواني لمدة خمس دقائق.
لإزالة الجسيمات غير القابلة للذوبان ، قم بالطرد المركزي للمحلول عند 10,000 × جم لمدة خمس دقائق. انقل المادة الطافية إلى دورق زجاجي سعة 150 مليلتر ، وأضف الأمفوليت لإنشاء محلول 1٪ من حيث الحجم ، حوالي 0.6 ملليلتر.
باستخدام حقنة سعة 50 ملليلترا ، بإبرة غير حادة مقاس 1.5 بوصة و 19 بوصة ، قم بتحميل المحلول في خلية IEF من خلال منافذ جمع العينات. بعد ذلك ، قم بإزالة الخلية من الحامل ، واضغط على حجرة القطب الكهربائي لإخراج وإزالة أي فقاعات.
قم بتوصيل الوحدة بمياه التبريد. مع توفير الطاقة عند 15 واط ثابتة ، ابدأ التجزئة. قم بتشغيل وحدة IEF حتى يصل الجهد إلى قيمة ثابتة ، حوالي ثلاث ساعات.
بعد الضغط على زر Harvest ON ، قم بمحاذاة دبابيس مجمع الكسور مع منافذ التجميع. ادفع المسامير من خلال شريط الختم لبدء جمع كسور Gymnema sylvestre.