تطبيق الربط الدائم الشريان المخي الأوسط في الماوس

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة نقص التروية الدماغية البؤري في النماذج الحيوانية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إجراء شق صغير في الجلد بين العين اليسرى وقاعدة الأذن. بعد ذلك، يتم إجراء عملية فتح الجمجمة عند نقطة التقاء القوس الوجنية والعظم القشري للكشف عن الشريان الدماغي الأوسط، ثم يتم ربط الشريان الدماغي الأوسط باستخدام جهاز كي الأوعية الصغيرة.

أخيراً، يتم خياطة الجلد لإغلاق الجرح. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج تظهر وجود احتشاء في نصف الكرة المخية الأيسر لدماغ الفأر. كما يمكن صبغ الدماغ باستخدام TTC أو مسحه باستخدام MRI لتصور السكتة الدماغية.

يمكن أيضاً استخدام دماغ مصاب بالسكتة الدماغية لتحديد تعبير البروتين أو mRNA. مرحباً، أنا جارزا تشولا، طالبة دراسات عليا في مختبر غيل جونسون بجامعة روتشستر.

يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال السكتة الدماغية، مثل توضيح الآليات التي تؤدي إلى موت الخلايا في الدماغ الإقفاري. وللتحضير للجراحة، يتم تعقيم جميع الأدوات الجراحية، والإسفنج الشاش، والمطبقَات المعرفية باستخدام الموصدة (autoclave). تُحفظ الأدوات الجراحية في 70%ethanol أثناء الجراحة وتُجفف بالهواء على شاش معقم مباشرة قبل الاستخدام.

قم برش منطقة العمل بـ 70% ethanol قبل ساعتين من الجراحة. احقن الفأر بـ 0.05 milligrams per kilogram من buprenorphine. يتم إعطاء العقار مرة أخرى فور انتهاء الجراحة، ثم كل ثلاث إلى خمس ساعات خلال فترة الـ 24 hour الأولى بعد الجراحة.

استخدم مبخرًا للتخدير لتخدير الفأر بمزيج غازي يتكون من 3% ISO fluorine و20% oxygen. اضبط كمية الأكسجين باستخدام مقياس التدفق. اختبر مستوى التخدير عن طريق قرص إصبع القدم أو الذيل.

حافظ على مستوى التخدير باستخدام 2% ISO fluorine. ضع الدموع الاصطناعية في عيني الفأر مع توخي الحذر لتجنب إتلاف العين أثناء الإجراء الجراحي.

ضع الفأر على جانبه الأيمن في وضعية جانبية باستخدام مقصات تقليم شعر الحيوانات. احلق المنطقة الموجودة على الجانب الأيسر بين العين اليسرى وقاعدة الأذن اليسرى. قم بتطهير المنطقة من خلال التناوب بين محلول Betadine والإيثانول بتركيز 70% باستخدام مسحات قطنية مع فرك المنطقة برفق.

من الضروري تكرار العملية. ضع الفأر على وسادة تدفئة متصلة بمجس شرجي، وللحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة Celsius، قم بإدخال المجس الشرجي باستخدام زيت معدني. ضع الفأر على جانبه الأيمن تحت المجهر وثبته باستخدام شريط لاصق.

اصنع فتحة في إسفنجة شاش وغطِّ المنطقة الجراحية باستخدام مقصات مستقيمة دقيقة. قم بإجراء شق عمودي بين العين اليسرى وقاعدة الأذن اليسرى. استخدم ملاقط مرقئة منحنية لإبقاء المنطقة الجراحية مفتوحة في حال حدوث جفاف مفرط للأنسجة أثناء الجراحة.

استخدم مساحات قطنية لوضع محلول PBS المعقم. استخدم مقصاً نابضاً لإجراء شق أفقي في العضلة الصدغية، ثم اسحب ببطء باستخدام الملاقط لفصل العضلة الصدغية قليلاً عن الجمجمة. ثبت عظمة الفك باستخدام ملاقط منحنية، واستخدم إبرة قياس 18 gauge لإجراء عملية فتح جمجمة صغيرة تحت صدغية عند نقطة التقاء القوس الوجني والعظم القشري.

باستخدام مقصات العظام، يزيل الباحثون قطعاً صغيرة من الجمجمة للكشف عن الشريان السباتي الأوسط (MCA). يجب عدم إتلاف القوس الوجني ومحتويات المدار خلال هذه العملية. وباستخدام كيّاع أوعية صغير، يتم ربط الجزء القاصي من الشريان السباتي الأوسط (MCA)، ثم يتم إعادة العضلة الصدغية إلى موضعها الأصلي، واستخدام خيوط جراحية من النايلون بمقاس 5/0.

لإغلاق موقع الشق، أوقف التخدير وأخرج المسبار الشرجي. احقن الفأر بجرعة ثانية من buprenorphine تحت الجلد. أعد الفأر إلى القفص الذي تم الحفاظ عليه عند 37 درجة Celsius.

باستخدام لوحة تسخين. راقب الفأر بدقة خلال الـ 24 ساعة القادمة لرصد أي علامات عدم ارتياح، بما في ذلك انخفاض الشهية أو استهلاك الماء، أو اتخاذ وضعية الانحناء، أو زيادة معدل التنفس، أو انتصاب الشعر. زود الفأر بهلام الاستشفاء فور انتهاء الجراحة.

انتظر لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات بعد الجراحة. بعد ذلك، يتم حقن الفأر بالـ buprenorphine تحت الجلد كل ثلاث إلى خمس ساعات لمدة تصل إلى 24 ساعة. وبعد 24 ساعة من الجراحة، يتم تخدير الفأر تخديرًا عميقًا وإجراء تروية له باستخدام 4%TTC.

قم بإزالة الدماغ ووضعه في محلول بارافورمالدهيد بتركيز 4% طوال الليل. وفي اليوم التالي، قم بتثبيت الدماغ في قالب التقطيع. استخدم شفرات الحلاقة لتقطيع الدماغ إلى شرائح بسمك واحد مليمتر.

ضع الشرائح بجوار مسطرة قياس مليمترية. وباستخدام كاميرا رقمية متصلة بمجهر تشريحي، قم بتصوير الشرائح باستخدام برنامج Image J.

انقر على قائمة الملف وافتح الصورة المطلوبة. انقر على تبويب الخط المستقيم في البرنامج. ارسم خطًا مستقيمًا بين الحافتين على المسطرة.

انقر على قائمة التحليل (analyze) واختر تعيين المقياس (set scale). حدد المسافة المعروفة كـ 1 ووحدة الطول كـ millimeter. انقر على علامة تبويب الدائرة اليدوية (freehand circle).

ارسم دائرة لتحديد نصف الكرة المخي opposite. انقر على قائمة التحليل (analyze) واختر قياس (measure). ستظهر نافذة الحسابات التي تعرض مساحة الدائرة المرسومة.

ارسم دائرة أخرى حول نصف الكرة المخي المتماثل، مع استبعاد منطقة الخط الأبيض. قم بقياس المساحة كما تم توضيحه سابقاً. ستتم إضافة القيمة الجديدة إلى نافذة الحساب.

يمثل الفرق بين القيمة الأولى والثانية مساحة الاحتشاء. احسب مساحة السكتة الدماغية في كل شريحة من خلال تكرار الخطوات المذكورة أعلاه لسماكة شرائح تبلغ 1 mm. ثم احسب حجم السكتة الدماغية عن طريق جمع مساحات السكتة الدماغية المحسوبة في كل شريحة.

يوضح هذا الشكل صبغة TTC للدماغ بعد 24 ساعة من الربط الدائم للشريان السباتي الأوسط (MCA) في فأر من سلالة C 57 BL six البرية. يظهر موقع السكتة الدماغية باللون الأبيض، ويمكن رؤيته من خلال تكبيرات وزوايا مختلفة. تظهر هنا شرائح بسمك 1 mm من دماغ مصاب بسكتة دماغية مصبوغة بـ TTC، مرتبة من الجزء الأمامي إلى الخلفي من المنطقة المصابة.

تم حساب الحجم بعد 24 ساعة من الجراحة. يبلغ حجم الاحتشاء حوالي 23 مليمتر مكعب بمجرد الانتهاء. يمكن تنفيذ هذه التقنية في غضون 30 دقيقة إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.

شكرًا للمشاهدة.