تطبيق الربط الدائم الشريان المخي الأوسط في الماوس

الهدف العام من هذا الإجراء هو دراسة نقص التروية الدماغية البؤري في النماذج الحيوانية. يتم تحقيق ذلك عن طريق عمل شق صغير أولا على الجلد بين العين اليسرى وقاعدة الأذن. بعد ذلك ، يتم إجراء بضع القحف عند تقاطع القوس الوجني والعظم الحرشفية لفضح الشريان الدماغي الأوسط ، ثم يتم ربط الشريان الدماغي الأوسط باستخدام كي الأوعية الدموية الصغيرة.

أخيرا ، يتم خياطة الجلد لإغلاق الجرح. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر احتشاء يقع في نصف الكرة الأيسر من دماغ الفأر. يمكن تلطيخ الدماغ ب TTC أو مسحه ضوئيا باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي لتصور السكتة الدماغية.

يمكن أيضا استخدام الدماغ السكتة الدماغية لتحديد تعبير البروتين أو الرنا المرسال. مرحبا ، أنا غارزا تشولا. أنا طالب دراسات عليا في مختبر جيل جونسون في جامعة روتشستر.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال السكتة الدماغية ، مثل توضيح الآليات التي تؤدي إلى خلية في الدماغ الإقفاري. للتحضير للجراحة ، قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية وإسفنج الشاش وأدوات التطبيق المعرفية بواسطة الأوتوكلاف. احتفظ بالأدوات الجراحية في 70٪ من الإيثانول أثناء الجراحة وجففها بالهواء على شاش معقم قبل الاستخدام مباشرة.

رش منطقة العمل بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل ساعتين من الجراحة. حقن الفأر ب 0.05 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين. سيتم إعطاء الدواء مرة أخرى مباشرة بعد الجراحة ، ثم كل ثلاث إلى خمس ساعات خلال أول 24 ساعة بعد الجراحة.

استخدم مبخر مخدر لتخدير الماوس بخلط غاز أكسجين 3٪ ISO و 20٪. اضبط كمية الأكسجين باستخدام مقياس التدفق. اختبر مستوى التخدير عن طريق الضغط على أصابع القدم أو الذيل.

الحفاظ على مستوى التخدير مع 2٪ فلور ISO. ضع الدموع الاصطناعية على عيون الفأر وتوخي الحذر لتجنب إتلاف العين. أثناء العملية الجراحية.

ضع الماوس على جانبه الأيمن في وضع جانبي باستخدام مقص. حلق المنطقة الموجودة على الجانب الأيسر بين العين اليسرى وقاعدة الأذن اليسرى. نظف المنطقة بالتناوب بين محلول البيتادين و 70٪ إيثانول إيثي باستخدام أدوات تطبيق ذات أطراف قطنية وفرك المنطقة برفق.

التكرار ضروري. ضع الماوس على وسادة تدفئة متصلة بمسبار المستقيم للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية ، أدخل مسبار المستقيم باستخدام الزيت المعدني. ضع الماوس على جانبه الأيمن تحت المجهر وثبته بشريط لاصق.

اقطع نافذة في إسفنجة شاش وقم بتغطية المنطقة الجراحية بمقص مستقيم ناعم. قم بعمل شق عمودي بين العين اليسرى وقاعدة الأذن اليسرى. استخدم مرقئ منحني لإبقاء المنطقة الجراحية مفتوحة في حالة حدوث جفاف مفرط للأنسجة أثناء الجراحة.

استخدم أدوات تطبيق ذات أطراف قطنية لتطبيق PBS المعقم. استخدم المقص الزنبركي لعمل شق أفقي على العضلة الصدغية واسحب ببطء باستخدام ملقط لفصل العضلة الصدغية قليلا عن الجمجمة. امسك عظم الفك بملقط منحني واستخدم إبرة قياس 18 لعمل بضع قحف صغير تحت الصدغي عند تقاطع القوس الوجني وعظم النعل الحرشفي.

مع تشغيل العظام ، يقوم المحلفون بإزالة قطع صغيرة من الجمجمة لفضح MCA. لا ينبغي أن يتلف القوس الوجني والمحتويات المدارية أثناء هذه العملية. باستخدام كاهي الأوعية الصغيرة ، قم بربط الجزء البعيد من MCA ، ثم ضع العضلة الصدغية مرة أخرى إلى موضعها الأصلي ، واستخدم خمس خيوط نايلون صفرية.

لإغلاق موقع الشق ، توقف عن التخدير وإزالة مسبار المستقيم. حقن الفأر بجرعة ثانية من البوبرينورفين تحت الجلد. أعد الفأر إلى القفص الذي تم الاحتفاظ به عند 37 درجة مئوية.

مع لوحة التدفئة. راقب الماوس عن كثب لمدة 24 ساعة القادمة بحثا عن أي إزعاج ، بما في ذلك انخفاض الشهية أو استهلاك الماء ، أو الوضعية المنحنية ، أو زيادة التنفس أو الشعر المنتصب. زود الفأر بجل التعافي مباشرة بعد الجراحة.

انتظر من ساعتين إلى ثلاث ساعات بعد الجراحة. ثم ه حقن الفأر مع البوبرينورفين تحت الجلد كل ثلاث إلى خمس ساعات حتى 24 ساعة. بعد 24 ساعة من الجراحة ، قم بتخدير الفأر بعمق وقم ببث الفأر بنسبة 4٪ TTC.

قم بإزالة الدماغ وضعه في محلول ألدهيد 4٪ شبه الشكل طوال الليل. في اليوم التالي ، ضع الدماغ في كتلة القسم. استخدم شفرات الحلاقة لتقطيع الدماغ إلى شرائح بسمك ملليمتر واحد.

ضع الشرائح بجوار مسطرة بمقياس ملليمتر. استخدام كاميرا رقمية متصلة بمجهر تشريح. تصوير الشرائح في برنامج الصورة J.

انقر فوق قائمة الملفات وافتح الصورة المطلوبة. انقر فوق علامة تبويب الخط المستقيم في البرنامج. ارسم خطا مستقيما بين الهامش على المسطرة.

انقر فوق قائمة التحليل وحدد تعيين المقياس. اضبط المسافة المعروفة على أنها واحد ووحدة الطول على أنها ملليمتر. انقر فوق علامة تبويب الدائرة اليدوية.

ارسم دائرة لتحديد نصف الكرة المقابل. انقر فوق قائمة التحليل وحدد القياس. ستظهر نافذة الحساب التي تعرض مساحة الدائرة المرسومة.

ارسم دائرة أخرى حول نصف الكرة الأرضية المماثل ، باستثناء منطقة السكتة الدماغية البيضاء. قم بقياس المنطقة كما هو موضح سابقا. ستتم إضافة القيمة الجديدة إلى نافذة الحساب.

يمثل الفرق بين القيمتين الأولى والثانية منطقة الاحتراق. احسب مساحة السكتة الدماغية في كل شريحة عن طريق تكرار الخطوات المذكورة أعلاه لسمك الشريحة البالغة ملليمتر واحد. احسب حجم السكتة الدماغية عن طريق جمع مساحة السكتة الدماغية المحسوبة في كل شريحة.

يوضح هذا الشكل دماغ صبغة TTC بعد 24 ساعة من ربط MCA الدائم في فأر بري من النوع C 57 BL. موقع السكتة الدماغية أبيض المظهر ويمكن رؤيته من زوايا وتكبير مختلفة. تظهر هنا شرائح بسمك ملليمتر واحد من دماغ السكتة الدماغية الملطخة TTC من الاحتشاء الأمامي إلى الخلفي.

تم حساب الحجم بعد 24 ساعة من الجراحة. حجم الاحتشاء حوالي 23 ملليمتر مكعب مرة واحدة خردل. يمكن إجراء هذه التقنية في 30 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

شكرا للمشاهدة.