الرحلان الكهربائي لجل بولي أكريلاميد ثنائي الأبعاد: تقنية فصل لتحليل البروتينات في خليط البروتين المركب بناء على الشحنة والوزن الجزيئي

بالنسبة للرحلان الكهربائي للهلام ثنائي الأبعاد لخليط البروتين المشتق من أنسجة الورم المتجانسة ، عالج بمخزن مؤقت يحتوي على chaotropes ، ومنظفات zwitterionic ، وعامل اختزال. تعمل Chaotropes والمنظفات على تشويه وحل البروتينات. تعمل عوامل الاختزال على تقليل روابط ثاني كبريتيد البروتينات ، مما يؤدي إلى توليد مجموعات ثيول حرة وكشف البروتينات للحصول على دقة مثالية للبروتين.

انقل خليط البروتين المعالج إلى تدرج الأس الهيدروجيني الثابت ، IPG ، حامل الشريط. ضع شريط IPG الذي يشتمل على تدرج الأس الهيدروجيني الخطي داخل مصفوفة هلام الأكريلاميد. أضف الزيت المعدني لمنع تبخر محلول البروتين. انقل الحامل إلى نظام تركيز متساوي الكهرباء. اسمح لمحلول البروتين بإعادة ترطيب الشريط.

إجراء IEF البعد الأول. يتسبب التيار الكهربائي في هجرة البروتينات المشحونة عبر تدرج الأس الهيدروجيني نحو الأقطاب الكهربائية ذات الشحنة المعاكسة ، مما يؤدي إلى تثبيت النقاط المتساوية الكهرباء الخاصة بها - الأس الهيدروجيني الذي يكون للبروتينات عنده شحنة صافية صفرية

بعد IEF ، عالج شريط IPG بكبريتات دوديسيل الصوديوم ، SDS ، وهو منظف أنيوني يضفي شحنة سالبة على البروتينات. التوازن مع عامل مؤلكل لتعديل مجموعات الثيول البروتينية ، مما يضمن قابلية ذوبان البروتين أثناء الرحلان الكهربائي.

قم بتحميل الشريط على جل مسبقة الصب صغير المسام لحل ب