موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 6:59 دقيقة • July 8th, 2025
إفراز مصفوفة البروتيناز المعدني ، أو MMP ، وهو بروتياز متعدد المجالات يشتمل على مجالات البروببتيد والتحفيزية ، كإنزيم غير نشط أو زيموجين بواسطة خلايا معينة. التفاعل بين أيون الزنك في المجال التحفيزي وبقايا السيستين في مجال البروببتيد يحافظ على MMP غير نشط.
للكشف عن MMPs في الطاف لزراعة الخلايا عن طريق الرحلان الكهربائي لهلام الزيموغرافيا ، املأ خزان الرحلان الكهربائي الذي يحتوي على كاسيت هلام بكبريتات دوديسيل الصوديوم أو المخزن المؤقت المحتوي على SDS.
قم بتحميل المادة الطافية المزروعة الممزوجة بمخزن التحميل ، متبوعا بمعايير البروتين ، في آبار من هلام بولي أكريلاميد ، مبلمرة مشتركة مع ركيزة بروتينية خاصة ب MMP.
SDS ، وهو منظف سالب الشحنة ، في ظل ظروف غير مختزلة ، يعطل تفاعلات السيستين والزنك في MMPs ويفسد طبيعة البروتينات بينما يضفي شحنة سالبة.
أداء الرحلان الكهربائي. يتسبب المجال الكهربائي في هجرة البروتينات سالبة الشحنة نحو الأنود موجب الشحنة ، مما يتسبب في فصل البروتينات على أساس الحجم.
بعد الرحلان الكهربائي ، عالج الجل بمحلول إعادة تشكيل غير أيوني يحتوي على منظفات. تحل المنظفات غير الأيونية محل SDS ، وتعيد تكوين البروتينات وتستعيد نشاط MMP جزئيا. تتم معالجة MMPs أيضا إلى حالة نشطة بالكامل.
احتضان في مخزن مؤقت نامي يحتوي على كاتيونات معدنية ثنائية التكافؤ ضرورية لنشاط MMP. MM
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية