موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:16 دقيقة • July 8th, 2025
الفوسفورية هي دهون معقدة تحتوي على مجموعات الفوسفات. يتم تحلل هذه الجزيئات بواسطة إنزيم يسمى الفوسفوليباز.
لإجراء فحص نشاط الفوسفوليباز ، خذ مستحلب صفار البيض الغني بالفوسفوليبيدات ، والتي تعمل كركيزة للإنزيم. أضف صفار البيض إلى محلول الاغاروز الدافئ الذي يحتوي على كلوريد الصوديوم ، مما يعزز استقرار بروتينات الصفار خلال الخطوات اللاحقة.
استكمل الخليط بكلوريد الكالسيوم وصبغة الفلورسنت - الرودامين. يسكب المزيج في طبق بتري. عند التصلب ، تظل الدهون الفوسفورية موزعة بشكل متجانس في مصفوفة هلام الاغاروز.
باستخدام أنبوب ، قم بإنشاء آبار بعيدة بشكل مناسب في الجل. أضف تركيزات متفاوتة من مستخلص البروتين الخام الذي يحتوي على الفوسفوليباز إلى الآبار. احتضان اللوحة في درجة حرارة فسيولوجية.
ينتشر الفوسفوليباز من المستخلص شعاعيا في الجل. ترتبط أيونات الكالسيوم الموجودة في الجل بالفوسفوليباز ، مما يؤدي إلى تنشيط الإنزيمات. يشق هذا الإنزيم الدهون الفوسفورية ، مما ينتج عنه أحماض دهنية حرة. تشكل جزيئات الرودامين الموجودة في الجل مركبا مع الأحماض الدهنية المنبعثة
عند الإضاءة بالأشعة فوق البنفسجية ، لاحظ ظهور هالات الفلورسنت حول الآبار. تؤكد الهالة وجود نشاط الإنزيم. مع تركيزات أعلى من الفوسفوليباز ، تنتشر جزيئات الإنزيم بشكل أكبر ، مما يزيد من قطر الهالة.
اغسل بيضة دجاج واحدة مع 1٪ SDS في ماء مق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية