مقايسة تماثل الخلايا المجهرية على شكل حلقة: تقنية في المختبر لتحديد التماثل متعدد الخلايا بناء على محاذاة الخلية على الأنماط الدقيقة على شكل حلقة

لتحديد تماثل خلايا الثدييات في المختبر - التحيز بين اليسار واليمين للخلايا لمحاذاة الاتجاه إلى اليسار أو اليمين في ظل ظروف محصورة - ابدأ بشرائح مطلية بالذهب مصنوعة حسب الطلب في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على الوسائط. تتكون الشرائح من أنماط دقيقة من الجزر على شكل حلقة من الفيبرونكتين المعزز للالتصاق الخلية ، مملوءة بطبقة أحادية التجميع ذاتية المقاومة للالتصاق الخلية.

بعد ذلك ، قم بزرع كمية مناسبة من تعليق خلايا الثدييات على الشرائح واحتضانها. تمتص الخلايا على الأنماط الدقيقة الحلقية المحتوية على الفيبرونكتين. تمنع الطبقة الأحادية المحيطة ذاتية التجميع ارتباط الخلية غير المحددة خارج حدود الحلقة.

استبدل الوسائط ، وقم بإزالة أي خلايا غير متصلة ، بوسائط جديدة. أضف دواء متداخل للأكتين إلى مجموعة واحدة من الشرائح واحتضنها.

تتكاثر الخلايا الملتصقة وتنتشر وتتخذ شكل جزر الفبرونيكتين الأساسية ، بينما تعيد تنظيم ألياف الأكتين استجابة للإشارات المكانية ، التي تحصر الطبقة الأحادية للخلية ، مما يعزز المحاذاة المتحيزة.

الآن ، عالج الشرائح باستخدام بارافورمالدهيد لتثبيت الخلايا. تحت الفحص المجهري لتباين الطور ، تظهر الخلايا الموجودة على الأنماط الدقيقة الحلقية كمناطق مظلمة ذات ملامح ساطعة محاذاة وفقا لتحيزها التفضيلي.

باستخدام البرنامج ، احسب زاوية محاذاة كل خلية على أنها انحراف عن الاتجاه المحيطي ل