فحص امتصاص الحويصلة خارج الخلية: طريقة لتصور وقياس الامتصاص الخلوي للحويصلات خارج الخلية باستخدام تقنية التصوير الفلوري ثلاثي الأبعاد

لتسهيل الاتصال الخلوي ، تفرز الخلايا حويصلات خارج الخلية ، EVs - هياكل بحجم النانو محاطة بغشاء دهني. تحمل المركبات الكهربائية شحنات بيولوجية مختلفة ، بما في ذلك الجزيئات الكبيرة والمستقلبات ، لتوصيلها إلى الخلايا المتلقية.

لتصور امتصاص الخلايا للمركبات الكهربائية باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر ، أولا ، خذ المركبات الكهربائية المعزولة حديثا. يتم تصنيف هذه المركبات الكهربائية مسبقا بأجسام مضادة مرتبطة بمسبار الفلورسنت لسهولة التصور اللاحق.

أضف حجما مناسبا من المركبات الكهربائية ذات العلامات الفلورية إلى ثقافة الخلايا المتلقية الملتصقة. احتضان للفترة المطلوبة. أثناء الحضانة ، ترتبط مجموعة سكانية فرعية من المركبات الكهربائية المصنفة بشكل سطحي بسطح الخلية ، بينما يتم استيعاب المركبات الكهربائية الأخرى.

أضف صبغة فلورية مختلفة لتسمية سيتوبلازم الخلية ، مما يساعد على تمييز المركبات الكهربائية الداخلية عن تلك الملتصقة بالخلية المتلقية. ضع الخلايا تحت مجهر متحد البؤر وصورة في مستويات بؤرية مختلفة على طول المحور z ، مع الحصول على سلسلة من الأقسام البصرية عبر سمك العينة.

قم

بتجميع هذه المجموعة من الأقسام البصرية - مكدس z - لتشكيل صورة عينة عالية الدقة وثلاثية الأبعاد. تطبيق العرض الافتراضي - عملية ما بعد التصوير - لإعادة بناء أسطح الخلايا.

للتمييز بين المركبات الكهربائية الملتصقة بشكل سطحي