$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تفرز الخلايا اللحمية المرتبطة بالسرطان عوامل كيميائية يمكن أن تحفز الخلايا السرطانية النقيلية الموجودة على الغشاء القاعدي للنسجة. وبالتالي ، تغزو الخلايا السرطانية الغشاء القاعدي وتهاجر نحو الفضاء خارج الخلية للنسجة.
لقياس القدرة الغازية للخلايا السرطانية في المختبر ، ابدأ بلوحة متعددة الآبار مع مصفوفات متعددة من ثلاث غرف. في كل مصفوفة ، تحتوي الغرفة السفلية على ثقافة ملتصقة من الخلايا اللحمة. الغرفة العلوية ذات الأقطاب الكهربائية الدقيقة المنصهرة لقياس المعاوقة - أقطاب كهربائية مصغرة تقيس النشاط الكهربائي للخلية - مغطاة بالخلايا السرطانية ، التي تلتصق بالغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه المطلي بالمصفوفة خارج الخلية الموجود فوق الأقطاب الكهربائية.
أثناء الحضانة على محلل قائم على المعاوقة ، تطلق الخلايا اللحمية عوامل كيميائية في الوسط ، والتي تتحرك نحو الخلايا السرطانية. تتحرك هذه العوامل عبر الغشاء شبه المنفذ الموجود في الجانب السفلي من الغرفة الوسطى.
تشير
العوامل التي تفرز الخلايا اللحمية إلى الخلايا السرطانية الملتصقة بالتحول إلى أنماط ظاهرية غازية. ردا على ذلك ، تهاجر الخلايا الغازية عبر الغشاء الصغير الذي يسهل اختراقه لتصل إلى الأقطاب الكهربائية المتداخلة على الجانب الآخر من الغشاء.
بمرور الوقت ، عندما تلتصق المزيد من الخلايا السرطانية بالأقطاب الكهربائية ، فإنها تسبب مقاومة خلوية - عائق لتدفق التيار بواسطة الخلايا. يدل قياس المعاوقة الخلوية على الإمكانات الغازية للخلايا السرطانية.
ضع جميع الغرف الثلاث المعقمة في غطاء مزرعة الأنسجة. حدد موقع المقبض على الجانب القصير من الغرفة السفلية ، وقم بتوجيه الغرفة السفلية بحيث يكون المقبض مواجها للمجريب.
أضف 30,000 إلى 50,000 خلية في 90 ميكرولترا من الوسائط إلى كل بئر من الغرفة السفلية دون تكوين أي فقاعات. استخدم 5٪ من الوسائط المكملة بمصل الأبقار الجنينية في غرفتين سفليتين كعنصر تحكم إيجابي في حركة الخلايا ، واستخدم وسائط مكملة بالمصل بنسبة 0٪ كعنصر تحكم سلبي.
قم بتدوير الغرفة السفلية عند 90 درجة بعد تركها تستقر لمدة 10 إلى 15 دقيقة في غطاء المحرك. ثم ضع الغرفة الوسطى في الأعلى ، بحيث ينزلق المقبض الموجود على الغرفة السفلية إلى الشق في الغرفة الوسطى. ادفع الغرفة عموديا لأسفل ، حتى تسمع نقرة من كل جانب من الجانبين الطويلين للتجميع.
أضف 160 ميكرولترا من الوسائط الخالية من المصل إلى جميع آبار الغرفة الوسطى. تأكد من ظهور الغضروف المفصلي على شكل قبة بعد ملء الآبار ، وضع الغرفة العلوية ، مع توجيه الأقطاب الكهربائية لأسفل ، على الغرفة الوسطى لمحاذاة النقاط الزرقاء في الغرف الوسطى والعليا. ادفع الغرفة عموديا لأسفل حتى يسمع صوت نقرة من كل جانب من الجانبين الطويلين للتجميع.
أضف 20 إلى 50 ميكرولترا من الوسائط الخالية من المصل إلى الحجرة العلوية. قم بتركيب التجميع على محلل الخلايا ثنائي الغرض في حاضنة زراعة الأنسجة ، وانتظر 30 دقيقة قبل قياس الخلفية.
افتح برنامج محلل الخلايا ، ثم حدد المهد المراد استخدامه ، متبوعا بنقرة على علامة التبويب "رسالة" ، وتأكد من أنه يقول "الاتصالات موافقة" للتأكد من أن المصفوفة في وضع جيد في المهد وأن الأقطاب الكهربائية محاذاة جيدا مع المستشعرات.
انقر فوق علامة التبويب "ملاحظات التجربة" واملأ جميع المعلومات الممكنة حول التجربة. ثم انقر فوق علامة التبويب "تخطيط" واملأ وصف تخطيط المصفوفة. ثم انقر فوق علامة التبويب "جدولة" وأضف خطوتين من قائمة "الخطوات" ؛ خطوة خلفية بمسح واحد ، وخطوة اختبار مع 100 عملية مسح.
بمجرد أن تكون المصفوفة في حاضنة محلل الخلايا ثنائية الغرض لمدة 30 دقيقة ، انقر فوق الزر "تشغيل" لبدء قياس الخلفية.
بعد الانتهاء من قياس الخلفية ، قم بإزالة المصفوفة من المهد ، ثم ضعها مرة أخرى في غطاء مزرعة الخلية. بعد ذلك ، أضف 30,000 إلى 50,000 خلية في 100 ميكرولتر من الوسائط الخالية من المصل إلى كل بئر في الغرفة العلوية. هذه هي الخلايا التي سيكتشفها القطب بمجرد أن ينتقل بنجاح عبر الغشاء.
دع المجموعة تقف في غطاء المحرك لمدة 30 دقيقة قبل تركيبها على محلل الخلية ثنائي الغرض لقياس المعاوقة.
ضع المصفوفة مرة أخرى في محلل الخلية ثنائي الغرض، وتحقق من علامة التبويب "رسالة" لرسالة "الاتصالات موافق". انقر فوق الزر "تشغيل" لبدء قياس المعاوقة ، ثم انقر فوق علامة التبويب "رسم" لمراقبة تقدم الإشارة.
إذا تم الوصول إلى نقطة النهاية قبل 25 ساعة ، فانقر فوق خطوة "إجهاض" من القائمة المنسدلة "تنفيذ". لتصدير البيانات ، انقر بزر الماوس الأيمن على الرسم البياني ، واختر "نسخ" بتنسيق القائمة ، ثم الصق البيانات في جدول بيانات.