مقايسة نشاط سينسيز السترات: اختبار لوني لقياس نشاط سينسيز سترات الميتوكوندريا في ذبابة الفاكهة الأنسجة المتجانسة

داخل الميتوكوندريا ، سينسيز السترات ، الموضعي في مصفوفة غشاء الميتوكوندريا الداخلي ، هو الإنزيم المحدد للمعدل الذي يحفز التفاعل بين أنزيم الأسيتيل أ وحمض الأكسالو أسيتيك لتكوين السترات ، وهي الخطوة الأولى في دورة حامض الستريك.

لتحليل نشاط سينسيز السترات ، انقل ذبابة الفاكهة البالغة ذبابة الفاكهة الصدر الوفير في الميتوكوندريا إلى أنبوب مملوء بمخزن استخلاص مبرد يحتوي على حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك ، EDTA ، ومنظف غير أيوني.

تجانس أنسجة الصدر على الجليد لمنع تمسخ البروتين بوساطة الحرارة. تعمل قوة القص المطبقة ، جنبا إلى جنب مع المنظفات ، على تحلل الأنسجة وتطلق مكونات داخل الخلايا ، بما في ذلك الميتوكوندريا.

علاوة على ذلك ، يؤدي تمزق غشاء الميتوكوندريا الداخلي إلى إطلاق بروتينات مصفوفة الميتوكوندريا ، بما في ذلك سينسيز السترات. يرتبط EDTA بالكاتيونات ثنائية التكافؤ ويمنع نشاط البروتياز ، وبالتالي يمنع تدهور البروتين.

قم بتخفيف التجانس باستخدام المخزن المؤقت للاستخراج وأضف حجما مناسبا إلى خليط التفاعل الذي يحتوي على آبار من الصفيحة متعددة الآبار. يتكون خليط التفاعل من أنزيم الأسيتيل أ وحمض أوكسالو أسيتيك وحمض ثنائي تيونيتروبنزويك.

يحفز سينسيز السترات في المتجانس التفاعل بين حمض الأكسالو أسيتيك وإنزيم الأسيتيل أ ، مكونا السترات والإنزيم المساعد أ مع مجموعة الثيول. تتفاعل مجموعة الثي