فحص حماية الإنزيم القائم على الليزوستافين: طريقة في المختبر لتحديد الحمل المكورات العنقودية الذهبية داخل الخلايا عن طريق القتل الانتقائي بوساطة الإنزيم للبكتيريا خارج الخلية

ابدأ بطبقة أحادية من الخلايا الظهارية في وسط ثقافة مناسب. تعبر هذه الخلايا عن الإنتجرينات - مستقبلات سطحية تمتد عبر الغشاء. تحتوي وسائط الثقافة على فيبرونيكتين يفرز الخلايا الظهارية - وهو بروتين سكري.

أضف تعليقا من المكورات العنقودية الذهبية - بكتيريا مسببة للأمراض موجبة الجرام - إلى لوحة الاستزراع. تحتوي هذه البكتيريا على بروتينات مرتبطة بالفبرونكتين ، أو FnBPs ، مثبتة في جدار الخلية.

احتضان الصفيحة لبدء العدوى البكتيرية ، حيث يرتبط الفيبرونيكتين ب FnBP للبكتيريا والإنتجرينات الموجودة على الخلايا المضيفة الظهارية. يتوسط هذا التفاعل الثلاثي FnBP-fibronectin-integrin الاستيعاب البكتيري في المضيف.

عالج الخلايا بالليزوستافين - إنزيم endopeptidase - واحتضانه. يدخل الليزوستافين بشكل انتقائي إلى جدران خلايا البكتيريا خارج الخلية. يشق جسور البنتاجيسين في الببتيدوغليكان ، وبالتالي يحللها بينما تظل البكتيريا داخل الخلايا محمية من الليزوستافين.

استكمل المزرعة بإنزيم محلل للبروتين لتعطيل الليزوستافين المتبقي ، ومنعه من قتل البكتيريا داخل الخلايا في الخطوات.

أضف عازلة تحلل إلى المزرعة ، مما يؤدي إلى تمزق الخلايا الظهارية المضيفة وإطلاق البكتيريا داخل الخلايا في تحلل الخلية. بعد ذلك ، قم بوضع محللة الخلية التي تحتوي على بكتيريا على صفيحة ثقافة مناسبة واحتضنها.

تنمو البكتيريا وتتكاثر لتشكل مستعم