موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:46 دقيقة • July 8th, 2025
ناقضات العظم ، الضامة متعددة النوى ، تسهل ارتشاف العظام - تكسير أنسجة العظام وإطلاق معادن العظام.
لتحديد كمية ارتشاف ناقضات العظم في المختبر ، قم بزراعة خلايا الدم المحيطية البشرية أحادية النواة في عامل تحفيز مستعمرة البلاعم ، M-CSF ، الذي يحتوي على وسائط للتمايز إلى خلايا سلف ناقضات العظم وملحقها. حصاد أسلاف ناقضات العظم وأجهزة الطرد المركزي.
ماصة تعليق الخلية المعلقة في الوسائط ، مكملة ب M-CSF ومنشط المستقبلات للعامل النووي kappa-Β ligand ، RANKL ، في آبار صفائح متعددة الآبار مطلية بفوسفات الكالسيوم ، تحاكي مكون العظام غير العضوي. يتسبب M-CSF و RANKL في تمايز سلف ناقضات العظم والاندماج في ناقضات العظم ، مما يؤدي إلى تنشيط الارتشاف.
تلتصق ناقضات العظم المنشطة بطلاء فوسفات الكالسيوم ، وتعيد تنظيم هيكلها الخلوي لتشكيل منطقة مانعة للتسرب غنية بالأكتين ، وتطور حدودا مكشكشة تفرز البروتونات والهيدرولاز الحمضي. تعمل البيئة الحمضية الناتجة على إذابة طلاء فوسفات الكالسيوم ، وإطلاق أيونات الكالسيوم والفوسفات وتشكيل حفرة ارتشاف.
بعد الحضانة ، اغسل الآبار وإزالة الأيونات الذائبة. إصلاح واختراق ناقضات العظم للتلوين اللاحق. تلطيخ خيوط الأكتين بصبغة مناسبة. قم بتلطيخ النوى بصبغة ملزمة للحمض النووي. تلطخ الكالسيوم في طلاء البئر بصبغة ملزمة للكالسيوم.
تحت المجهر الفلوري ، تظهر ناقضات العظم الوظيفي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية