فحص ثنائي الطبقة الدهنية المدعوم كرويا: تقنية لمراقبة تجميع septin على الكريات المجهرية
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:02 دقيقة • July 8th, 2025
السيبتين هي بروتينات الهيكل الخلوي الرئيسية التي ترتبط بأسطح غشاء البلازما المنحنية.
لمراقبة تجميع septin في المختبر على الكريات المجهرية ، أولا ، خذ تعليقا من حبات السيليكا المجهرية ذات الحجم الموحد ، والتي تعمل كدعم قوي لتكوين الطبقة الثنائية. دوامة هذا التعليق لكسر أي مجموعات الخرز.
استكملها بحويصلات صغيرة أحادية الصفيحة ، وسيارات الدفع الرباعي - حويصلات كروية محاطة بطبقة ثنائية دهنية واحدة. احتضان مع التحريض المستمر ، مما يمنع الكريات المجهرية من الاستقرار.
أثناء الحضانة ، تسهل مجموعات الرأس القطبية الخارجية امتصاص سيارات الدفع الرباعي على سطح الكرة المجهرية المحبة للماء. يتسبب هذا التفاعل في تمزق سيارات الدفع الرباعي ، متبوعا باندماج دهون سيارات الدفع الرباعي على سطح الكرة المجهرية المنحني كطبقة مستمرة ، مما ينتج عنه تكوين طبقة ثنائية دهنية كروية مدعومة ، SLB.
يغسل لإزالة الدهون الزائدة غير المرتبطة وإعادة تعليقه في المخزن المؤقت للتفاعل. انقل معلق SLB الكروي إلى منطقة صغيرة من سطح مطلي بالبولي إيثيلين جلايكول ، لمنع الامتصاص غير المحدد. أضف معلق الحاجز المسمى بالفلورسنت إلى الغرفة واحتضانه.
تشكل Septins قلة قليلة غير متجانسة تتعرف على الانحناء الإيجابي ل SLBs الكروية ، وتبلمر لتشكيل خيوط. في النهاية ، تتفاعل خيوط septin مع بعضها البعض ، مما يؤدي إلى تكوين هياكل ذات ترتيب أعلى
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية